Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol . 0 4 | Núm . 0 2 | Abr Jun | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com ISSN: 3073 - 1356 Articulo Pseudomonas spp. como biocontrol de la muerte descendente por Phytophthora palmivora en Tectona grandis Pseudomonas spp. as biocontrol of Phytophthora palmivora dieback in Tectona grandis Joselyn Jacqueline Quintana Zambrano 1 , Fernando Abasolo - Pacheco 2 * , Johana Carolina Guanoquiza Calero 3 , Cesar Sebastián Borja Freile 4 y Danna Belén Castillo Quijije 5 1 Universidad Técnica Estatal de Quevedo , Ecuador , Quevedo ; https://orcid.org/0009 - 0008 - 8893 - 5949 , joselyn.quintana2014@uteq.edu.ec 2 * Universidad Técnica Estatal de Quevedo , Facultad de Ciencias Agrarias y Forestale , Ecuador , Quevedo ; https://orcid.org/ 0000 - 0003 - 2268 - 7432 3 Universidad Técnica Estatal de Quevedo , Ecuador , Quevedo ; https://orcid.org/0009 - 0003 - 1072 - 0642 , carolina.guanoquiza2015@uteq.edu.ec 4 Universidad Técnica Estatal de Quevedo , Ecuador , Quevedo ; https://orcid.org/0009 - 0009 - 3777 - 217 1 , cborjaf@uteq.edu.ec 5 Universidad Técnica Estatal de Quevedo , Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales , Ecuador , Quevedo ; https://orcid.org/0000 - 0002 - 3172 - 6504 , dcastilloq@uteq.edu.ec * Correspondencia : fabasolo@uteq.edu.ec https://doi.org/10.70881/mcj/v4/n2/155 Resumen: La teca es un árbol de gran valor comercial que enfrenta amenazas fitosanitarias como la muerte descendente causada por P. palmivora , un hongo del suelo que compromete el desarrollo y supervivencia de las plántulas. Frente a la limitada eficacia de los mét odos convencionales, esta investigación evaluó el uso de rizobacterias del género Pseudomonas como alternativa biológica para el control del patógeno. Se aplicó un Diseño Completamente al Azar (DCA) con seis tratamientos (cinco cepas bacterianas y un contr ol) y tres repeticiones. Los resultados destacaron las cepas bacterianas aisladas presentaron diversidad morfológica, bioquímica y funcional, destacándose BZ1 y QV2 por su alta capacidad de producción de ácido indolacético (AIA) La cepa QV3 como la más efe ctiva: inhibió el crecimiento de P. palmivora en un 78 %, redujo la incidencia de la enfermedad al 22 , 4 % y la severidad al 7 , 9 %. En cuanto al crecimiento vegetal, QV3 promovió la mayor altura de planta (30 , 2 cm), mayor diámetro, peso fresco de biomasa aé rea (28 , 2 g) y radicular, contenido de clorofila (37 , 6 SPAD) y volumen radicular (11 , 8 cm³). En conclusión, la cepa QV3 demostró alto potencial como agente de biocontrol y bioestimulante, destacándose por su doble función en la supresión del patógeno y pro moción del desarrollo de T. grandis . Palabras clave: Biocontrol ; severidad ; incidencia ; ácido indolacético . Abstract: Teak is a tree of great commercial value that faces phytosanitary threats such as dieback caused by P. palmivora , a soil fungus that compromises the development and survival of seedlings. Given the limited effectiveness of conventional methods, this resear ch evaluated the use of rhizobacteria of the genus Pseudomonas as a biological alternative for controlling the pathogen. A completely randomised Cita: Quintana Zambrano, J. J., Abasolo - Pacheco, F., Guanoquiza Calero, J. C., Borja Freile, C. S., & Castillo Quiji je, D. B. (2026). Pseudomonas spp. como biocontrol de la muerte descendente por Phytophthora palmivora en Tectona grandis. Multidisciplinary Collaborative Journal , 4 (2), 120 - 142. https://doi.org/10.70881/mcj/ v4/n2/155 Recibido: 05 / 03 /20 26 Revisado: 02 / 04 /20 26 Aceptado: 10 / 04 /20 26 Publicado: 17 / 05 /20 26 Copyright: © 202 6 por los autores . Este artículo es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos y condiciones de la Licencia Creative Commons, Atribución - NoComercial 4.0 Internacional. ( CC BY - NC ) ( https://creativecommons.org/lice nses/by - nc/4.0/ )
Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com Figura 1 . Aislamiento de bacterias Pseudomonas spp. en medio selectivo Nota: En la figura de la izquierda se observa el c recimiento de colonias bacterianas en medio sólido observado bajo luz blanca, con morfología circular, borde re gular y color blanquecino. En la figura de la derecha se observan c olonias observadas bajo luz ultravioleta, mostrando fluorescencia característica asociada a la producción de sideróforos ( Pseudomonas spp.). 3.2. Cuantificación de la producción de ácido indolacético (AIA) En la cuantificación de la producción de ácido indolacético (AIA) expresada en µg·mL ¹ por parte de las cepas seleccionadas, se observaron diferencias estadísticamente significativas entre los tratamientos (p<0.05). En la Figura 2, se muestra que las cepas BZ1 y QV2 registraron las mayores concentraciones de AIA, con valores de 14 , 7 y 11 , 7 µg·mL ¹ respectivamente. En contraste, las cepas QV3 y BZ4 mostraron una producción significativamente menor de AIA, con valores de 7 , 3 y 6 , 0 µg· mL ¹ r espectivamente.
Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com Figura 2 Cuantificación de la producción de ácido indolacético (AIA) Nota: Las barras indican la media de cada tratamiento. Líneas verticales la desviación estándar de cada cepa. Letras diferentes denotan diferencias estadísticas significativas entre tratamientos, Tukey (p<0 , 05). 3.3. Evaluación temporal de la producción de ácido indolacético (AIA) Los datos presentados en la Fig. 3, indican la evaluación temporal de la producción de ácido indolacético (AIA) por parte de las cepas BZ1 y QV2 reveló patrones dinámicos en la biosíntesis de la fitohormona a lo largo de un período de 50 horas. En ambas cepas, la producción de AIA fue nula en el tiempo inicial (0 h), incrementá ndose progresivamente con el paso de las horas. La cepa BZ1 mostró un aumento moderado hasta las 20 horas (4 µg·mL ¹ a 10 h y 6 µg·mL ¹ a 20 h), alcanzando su pico máximo a las 30 horas con una producción de 15 µg·mL ¹ . Posteriormente, se evidenció una dis minución gradual hasta 10 µg·mL ¹ a las 40 h y 6 µg·mL ¹ a las 50 h. Por su parte, la cepa QV2 exhibió un patrón similar, con incrementos hasta las 30 horas (3 , 8 y 12 µg·mL ¹ en los tiempos de 10, 20 y 30 h, respectivamente), seguidos también de una reducc ión a 8 µg·mL ¹ a las 40 h y 4 µg·mL ¹ a las 50 h.
Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com Figura 3 Evaluación de la producción de ácido indolacético (AIA) 3.4. Porcentaje de inhibición del crecimiento de P. palmivora En la evaluación del efecto antagonista de las cepas bacterianas sobre el crecimiento de P. palmivora , se observaron diferencias significativas en los porcentajes de inhibición, con valores que oscilaron entre el 41 % y el 78 %, en contraste con el tratamiento control que no presentó inhibición (0 %). Las cepas QV3 y BZ1 mostraron la mayor capacidad inhibitoria, con porcentajes de 78 % y 72 % respectivamente. En cambio, las cepas QV2 y BZ4 presentaron menores porcentajes de inhibición, con valores de 48 % y 41 %, respectivamente (Figuras 4 y 5). Figura 4 Porcentaje de inhibición del crecimiento de P. palmivora aplicando bacterias del género Pseudomonas, con potencial antagónico. Nota: Las barras indican la media de cada trat amiento. Líneas verticales la desviación estándar de cada cepa. Letras diferentes denotan diferencias estadísticas significativas entre tratamientos, Tukey (p<0 , 05).
Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com Figura 5 Prueba de antagonismo de P. palmivora aplicando bacterias del género Pseudomonas seleccionadas Nota: Se observa la inhibición del crecimiento micelial en presencia de las cepas QV2, QV3, BZ1 y BZ4, en comparación con el control sin bacteria. 3.5. Porcentaje de incidencia de P. palmivora El análisis del porcentaje de incidencia de la enfermedad causada por P. palmivora evidenció diferencias estadísticamente significativas entre los tratamientos bacterianos evaluados. En la Figura 6 se refleja que el tratamiento control (T0), sin aplicación de cepas bacterianas, presentó la mayor incidencia con un 89.1 %. En contraste, la cepa QV3 mostró la menor incidencia con un 22.4 %, lo que indica una notable eficacia en la reducción del desarrollo de la enfermed ad. Las cepas QV2, BZ1 y BZ4 mostraron incidencia con porcentajes de 48 %, 50.3 % y 54.1 %, respectivamente, sin diferencias estadística entre ellos.
Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com Figura 6 Porcentaje de incidencia de P. palmivora en plántulas de teca. Nota: Las barras indican la media de cada tratamiento. Líneas verticales la desviación estándar de cada cepa. Letras diferentes denotan diferencias estadísticas significativas entre tratamientos, Tukey (p<0 , 05). 3.6. Porcentaje de severidad de P. palmivora El análisis del porcentaje de severidad de la enfermedad causada por P. palmivora mostró diferencias altamente significativas entre los tratamientos bacterianos evaluados. El tratamiento control (T0), sin aplicación de cepas bacterianas, registró el valor más alto con un 91.4 %. En contraste, la cepa QV3 presentó la menor severidad con un 7 , 9 %. Las cepas BZ1 y QV2 redujeron la severidad a 27 , 1 % y 41 , 4 %, respectivamente, mientras que la cepa BZ4 registró un 54 , 7 % (Figura 7 y 8). Figura 7 Porcentaje de severidad de P. palmivora en plántulas de T. grandis. Nota : Las barras indican la media de cada tratamiento. Líneas verticales la desviación estándar de cada cepa. Letras diferentes denotan diferencias estadísticas significativas entre tratamientos, Tukey (p<0 , 05).
Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com Figura 8 Severidad de plántulas de T. grandis a los 21 días posteriores a la inoculación con P. palmivora y la aplicación de cepas rizobacterianas antagonistas. Nota: (A) QV2; (B) BZ4; (D) QV3; (E) BZ1. Testigo patógeno ( Phytophthora sp.) (C) y (F). 3.7. Características morfofisiológicas Los resultados mostraron diferencias significativas entre los tratamientos en todas las características morfofisiológicas evaluadas en plántulas de T. grandis expuestas a P. palmivora . El tratamiento QV3 presentó la mayor altura de planta, alcanzando 30 , 2 cm, así como el mayor diámetro de tallo, con 5 , 0 mm. Asimismo, generó mayor producción de biomasa, tanto en peso fresco (28 , 2 g) como en peso seco (7 , 4 g), y también presentó el contenido más alto de clorofila, medido con 37 , 6 unidades SPAD . En cuanto al desarrollo radicular, QV3 registró el volumen más alto con 11 , 8 cm³. En contraste, el tratamiento T0 (sin inoculación bacteriana) mostró la menor altura (21 , 4 cm), el menor peso fresco (18 , 3 g), el menor contenido de clorofila (28 , 3 SPAD), a sí como el volumen radicular más reducido (85 cm³). Los tratamientos BZ1, BZ4 y QV2 mejoraron el crecimiento respecto al testigo, pero no alcanzaron los niveles observados en QV3, indicando una efectividad diferenciada entre cepas bacterianas (Tabla 2) .
Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 4. Discusión Los resultados obtenidos en este estudio confirmaron la eficacia de rizobacterias del género Pseudomonas como agentes de biocontrol y promotores del crecimiento vegetal en plántulas de T. grandis afectadas por P. palmivora . El aislamiento y caracterización de cepas nativas permitió evidenciar una amplia diversidad morfológica, bioquímica y funcional, lo cual es coherente con lo reportado por Muthiah et al. (2023) , quienes destacan la plasticidad metabólica del género Pseudomonas y su habilidad para adapta rse a múltiples nichos ecológicos. En la presente investigación, se demostró que varias cepas aisladas mostraron resultados positivos en pruebas de fluorescencia, ureasa, catalasa y oxidasa, excepto VL3, que presentó particularidades bioquímicas, incluida una tinción Gram positiva, algo inusual en Pseudomonas spp., que suelen ser Gram negativas (Wali et al., 2024) . Esta variabilidad bioquímica sugiere la existencia de poblaciones bacterianas con rasgos fenotípicos atípicos, lo cual podría deberse a la pr esión ambiental específica de los suelos rizosféricos de las zonas productoras de teca en el litoral ecuatoriano. Tal variabilidad también ha sido documentada por Haque et al. (2024) , quienes indican que incluso cepas taxonómicamente próximas pueden dife rir en su expresión enzimática y capacidad antagonista. La producción de ácido indolacético (AIA) se destacó como un rasgo diferencial entre cepas, siendo las cepas BZ1 y QV2 las que evidenciaron mayor síntesis de esta fitohormona. Aunque la cepa QV3 produ jo menor AIA, sus resultados en el control de P. palmivora fueron superiores, lo cual demuestra que la eficacia en biocontrol no depende exclusivamente de la producción de AIA, sino de un conjunto de mecanismos que incluyen la producción de metabolitos sec undarios, sideróforos, y enzimas hidrolíticas (Simamora et al., 2024) . Hernández - Rodríguez et al. (2023), también observaron que algunas cepas de Pseudomonas con baja producción de AIA podían presentar gran capacidad de antagonismo debido a la síntesis de antibióticos como piocianina y fenazinas, que inhiben la germinación y crecimiento de hongos patógenos. La capacidad inhibitoria de las cepas sobre el crecim iento de P. palmivora in vitro mostró diferencias notables. En particular, la cepa QV3 evidenció el mayor porcentaje de inhibición, lo que es consistente con las investigaciones de Anand et al. (2020) , quienes reportaron cepas de Pseudomonas spp. capaces de inhibir más del 70 % del crecimiento de Phytophthora spp. en cultivos duales. Este antagonismo puede atribuirse a la producción de compuestos antifúngicos y a la competencia por espacio y nutrientes. Además, las bacterias pueden secretar enzimas como q uitinasas y glucanasas, capaces de degradar las paredes celulares del hongo, mecanismo señalado también por Volynchikova y Kim (2023), en estudios sobre biocontrol de fitopatógenos del suelo.
Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com Ot ro aspecto observado fue la disminución de la incidencia y s everidad de la enfermedad en las plántulas tratadas con rizobacterias, especialmente con la cepa QV3. Aunque la producción de AIA de esta cepa no fue mayor, su impacto en la protección de las plántulas fue notoriamente superior. Esto confirma que la eficac ia en biocontrol de Pseudomonas puede estar más relacionada con la producción de metabolitos antimicrobianos y con la inducción de resistencia sistémica en las plantas (Hajabdollahi et al., 2021) . Este hallazgo coincide con lo señalado por Khaeruni et al . (2022) , quienes documentan que cepas de P. fluorescens pueden activar genes de defensa en plantas hospederas, reduciendo significativamente los síntomas de enfermedades vasculares. Además, la reducción en la severidad y la incidencia de la enfermedad e n los tratamientos bacterianos indica una interacción positiva planta - microorganismo, donde las rizobacterias no solo actúan como barrera física o química contra el patógeno, sino que además modifican la respuesta inmune de la planta (Yang & Hong, 2020) . Sheng et al. (2024), destacan que esta activación de defensas inducidas puede involucrar vías como el ácido salicílico y el ácido jasmónico, promoviendo la producción de proteínas PR ( Pathogenesis Related Proteins ) y fitoalexinas, que refuerzan las barreras estructurales y químicas de la planta contra el avance del patógeno. La influencia de las rizobacterias sobre las variables morfofisiológicas de las plántulas de T. grandis constituye uno de los hallazgos más relevantes del presente estudio, dado que se observó un incremento significativo en altura, diámetro, biomasa aérea y radicular, contenido de clorofila y volumen radicular en las plantas tratadas, especialmente en aquellas inoculadas con la cepa QV3. Este resultado refleja el efecto bioestimul ante de las rizobacterias, fenómeno que ha sido ampliamente documentado en la literatura, donde se reporta que cepas de Pseudomonas pueden liberar compuestos promotores del crecimiento, tales como ácido indolacético (Zboralski & Filion, 2020) , sideróforo s, citoquininas (Costa - Gutierrez et al., 2022) y ácido giberélico, los cuales influyen directamente en la morfogénesis vegetal (Cochard et al., 2022) . En particular, la mejora en el contenido de clorofila registrada en las plantas tratadas sugiere un mejor estado fisiológico y una mayor capacidad fotosintética, lo que repercute en la producción de biomasa. Esto coincide con lo descrito por Aslani et al. (2024) , quienes señalan que rizobacterias como P. fluorescens pueden modular el metabolismo del ni trógeno y la síntesis de pigmentos fotosintéticos, contribuyendo así a un vigor vegetal superior. Adicionalmente, las bacterias pueden estimular la síntesis de proteínas y enzimas asociadas al proceso fotosintético, generando plantas con mayor potencial de crecimiento y adaptación a condiciones adversas (Anwar et al., 2024) . Por otro lado, el incremento observado en el volumen radicular de las plantas tratadas con QV3 podría estar vinculado a la capacidad de ciertas cepas de Pseudomonas spp. para solubilizar fosfatos y otros nutrientes esenciales,
Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com m ejorando así la absorción mi neral por las raíces (Sanclemente et al., 2017) . Este mecanismo ha sido descrito por Chalaraca - Vélez y Gaviria (2020) , quienes destacan que bacterias rizosféricas pueden liberar ácidos orgánicos que movilizan fosfatos insolubles en el suelo, haciéndolo s disponibles para la planta. La mayor disponibilidad de nutrientes no solo favorece el desarrollo radicular, sino que potencia el crecimiento general de la planta, reforzando su tolerancia a factores bióticos y abióticos (Muthiah et al., 2023; Maleki et a l., 2017; Park et al. 2009) . Asimismo, es importante considerar que las rizobacterias pueden inducir cambios en la arquitectura radicular, promoviendo una mayor ramificación y longitud de raíces finas, lo que incrementa el volumen de exploración del suel o y facilita la captación de agua y nutrientes (Gupta et al., 2021; Kashyap et al. , 2021) . Esto coincide con el incremento observado en las plántulas tratadas en este estudio, particularmente con QV3, lo cual refleja una interacción simbiótica efectiva e ntre la rizobacteria y la planta hospedera (Ali et al., 2021) . La presente investigación aporta evidencia sólida sobre el potencial de las rizobacterias del género Pseudomonas , particularmente la cepa QV3, como herramientas biotecnológicas para el manejo de la muerte descendente en T. grandis . No solo se confirma su e fecto antagonista contra P. palmivora , sino que se destaca su capacidad para promover el crecimiento vegetal, consolidando su perfil como agente de biocontrol y bioestimulante. Sin embargo, para su implementación a gran escala, resulta imprescindible valid ar estos resultados en campo y desarrollar estrategias de formulación que aseguren la viabilidad y eficacia de estas bacterias bajo condiciones ambientales variables. 5. Conclusiones La presente investigación demostró que la rizósfera de Tectona grandis constituye un reservorio relevante de rizobacterias con alta diversidad morfológica, bioquímica y funcional, capaces de interactuar activamente con el desarrollo vegetal y con fitopatóg enos del suelo. La caracterización integral de los aislados permitió identificar cepas con perfiles funcionales diferenciados, particularmente en la producción de metabolitos promotores del crecimiento, lo que confirmó el cumplimiento del objetivo orientad o a la selección de microorganismos con potencial bioestimulante y fitoprotector. Se comprobó que las cepas bacterianas evaluadas ejercieron un efecto antagonista efectivo frente a Phytophthora palmivora , tanto en condiciones in vitro como in situ, evidenc iando su capacidad para limitar el desarrollo del patógeno y reducir la expresión de la enfermedad en plántulas de teca. Estos resultados validaron la hipótesis de que rizobacterias nativas pueden interferir en los procesos de infección y colonización del oomiceto, destacando su potencial
Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com p ara integrarse en estrategias de manejo biológico de enfermedades de origen edáfico. Asimismo, la aplicación de rizobacterias permitió mitigar los efectos negativos del patógeno sobre el crecimiento de las plántulas, prom oviendo mejoras consistentes en variables morfofisiológicas clave. Este comportamiento evidenció un efecto dual de las cepas más eficientes, al combinar mecanismos de biocontrol con la estimulación del desarrollo vegetal, lo que resulta especialmente relev ante en etapas tempranas del establecimiento de plantas forestales, donde la susceptibilidad a patógenos es elevada. Contribución de los autores: Conceptualización, F - A - P, J - J - Q - Z ; análisis formal, J - J - Q - Z, C - S - B - F, J - C - G - C ; investigación J - J - Q - Z , C - S - B - F ; recursos F - A - P , J - J - Q - Z ; redacción del borrador original, F - A - P, D - B - C - Q ; redacción, revisión y edición F - A - P , J - C - G - C, D - B - C - Q ; supervisión, F - A - P . Todos los autores han leído y aceptado la versión publicada del manuscrito. Agradecimientos: Agradecemos a la Facultad de Posgrado de la UTEQ y a SENESCYT por la beca otorgada , que hizo posible el desarrollo de esta investigación. E xtendemos nuestro agradecimiento al personal técnico de los laboratorios de Microbiología y Química , Ing. Ángel Cedeño e Ing. Erick García, respectivamente, por su valioso apoyo durante la ejecución del estudio. Financiamiento: Esta investigación no ha recibido financiación externa Declaración de disponibilidad de datos: Los datos están disponibles prev ia solicitud a los autores de correspondencia: Conflicto de interés: Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses Referencias Bibliográficas Ali Salim, H., Kadhum, A. A., Fadhil Ali, A., Nayef Saleh, U., Hameed Jassim, N., Rahim Hamad, A., Abdulrahman Attia, J., Jumaa Darwish, J., Falih Hassan, A., & Author, C. (2021). Response of Cucumber Plants to PGPR Bacteria ( Azospirillum brasilense , Pseud omonas f luorescens and Bacillus m egaterium ) and Bread Yeast ( Saccharomyces cerevisiae ). Systematic Reviews in Pharmacy , 12 (1). A ltschul , S. F., Gish, W., Miller, W., Myers, E. W., & Lipman, D. J. (1990). Basic local alignment search tool. Journal of Molecular Biology, 215 (3), 403 410. https://doi.org/10.1016/S0022 - 283 6(05)80360 - 2 Álvarez - García, A., Santoyo, G., & del Carmen, M. (2020). Pseudomonas fluorescens: Mecanismos y aplicaciones en la agricultura sustentable .
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