Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol . 0 4 | Núm . 0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com ISSN: 3073 - 1356 136 Artículo Evaluación descriptiva del deterioro asociado a Fusarium equiseti en frutos de fresa tratados con Trichoderma spp. Descriptive assessment of Fusarium equiseti - associated decay in strawberry fruits treated with Trichoderma spp. Cristian Yasmani Masache - Segovia 1 *, Mercedes Susana Carranza - Patiño 2 , Juan Antonio Torres - Rodríguez 3 , Carmen Victoria Marín - Cuevas 4 y Robinson J. Herrera - Feijoo 5 1 Universidad Técnica Estatal de Quevedo, Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, Quevedo, Los Ríos, Ecuador; https://orcid.org/0009 - 0004 - 6765 - 6626 2 Universidad Técnica Estatal de Quevedo, Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, Quevedo, Los R íos, Ecuador; https://orcid.org/0000 - 0002 - 0917 - 0415 ; mcarranza@uteq.edu.ec 3 Universidad Técnica Estatal de Quevedo, Facultad de Ciencias Agrarias y Foresta les, Quevedo, Los Ríos, Ecuador; https://orcid.org/0000 - 0003 - 3326 - 4371 ; jtorres@uteq.edu.ec 4 Universidad Técnica Estatal de Quevedo, Facultad de Ciencias Agr arias y Forestales, Quevedo, Los Ríos, Ecuador; https://orcid.org/0000 - 0002 - 8128 - 9170 ; cmarin@uteq.edu.ec 5 Escuela Superior Politécnica de Chimborazo (ESPOCH), Riobamba, Chimborazo, Ecuador; https://orcid.org/0000 - 0003 - 3205 - 2350 ; robinson.herrera@espoch.e du.ec * Correspondencia: cmasache@uteq.edu.ec https://doi.org/10.70881/mcj/v4/n3/173 Resumen: La pudrición asociada a Fusarium equiseti limita la calidad poscosecha de la fresa ( Fragaria × ananassa ) y exige alternativas de manejo biológico. En consecuencia, el objetivo del estudio fue evaluar, de forma descriptiva, la progresión macroscópica del deterioro asociado a un aislamiento de F. e quiseti identificado molecularmente mediante el marcador TEF (factor de elongación de la traducción) y su interacción con una formulación comercial de Trichoderma spp. en frutos de fresa bajo condiciones controladas. Para ello, el ensayo se organizó con ci nco tratamientos: aplicación curativa, aplicación preventiva, control positivo con F. equiseti , control antagonista con Trichoderma spp. y control de microclima. La severidad se registró a los 0, 1, 2, 3 y 6 días después de la primera inoculación mediante una escala ordinal de cero a cuatro basada en cobertura micelial visible y deterioro estructural. Debido a que la matriz disponible corresponde a valores consolidados por tratamiento y tiempo de evaluación, los resultados se analizaron mediante indicadores descriptivos y no mediante pruebas inferenciales. El control positivo con F. equiseti presentó la mayor área bajo la curva de severidad visual ordinal (ASCPE = 22,0; 91,7 % relativa) y alcanzó nivel cuatro a 2 DDPI. La aplicación curativa registró ASCPE = 21,0 (87,5 % relativa) y alcanzó nivel 4 a 3 DDPI, mientras que la aplicación preventiva registró ASCPE = 17,5 (72,9 % relativa) y alcanzó nivel cuatro a 6 DDPI. Estos resultados sugieren que el establecimiento previo de Trichoderma spp. retrasó visualmen te la Cita: Masache - Segovia, C. Y., Carranza - Patiño, M. S., Torres - Rodríguez, J. A., Marín - Cuevas, C. V., & Herrera - Feijoo, R. J. (2026). Evaluación descriptiva del deterioro asociado a Fusarium equiseti en frutos de fresa tratados con Trichoderma spp. Multidisciplina ry Collaborative Journal , 4 (3), 136 - 152. https://doi.org/10.70881/mcj /v4/n3/173 Recibido: 04 / 06 /20 26 Revisado: 25 /07/2026 Aceptado: 30/07/2026 Publicado: 04/08/2026 Copyright: © 2026 por los autores. Este artículo es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos y condiciones de la Licencia Creative Commons, Atribución - NoComercial 4.0 Internaci onal. ( CC BY - NC ) . ( https://creativecommons.org/lice nses/by - nc/4.0/ )
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 137 progresión del deterioro; no obstante, la evidencia debe interpretarse como preliminar y descriptiva. Palabras clave: antagonismo fúngico; control biológico; Fusarium equiseti ; identificación molecular; severidad ordinal; TEF . Abstract: Fusarium equiseti - associated decay limits the postharvest quality of strawberry ( Fragaria × ananassa ) and requires biological management alternatives. Accordingly, this study aimed to descriptively assess the macroscopic progression of decay associated wit h a F. equiseti isolate molecularly identified using the TEF marker and its interaction with a commercial Trichoderma spp. formulation in strawberry fruits under controlled conditions. The assay included five treatments: curative application, preventive ap plication, F. equiseti positive control, Trichoderma spp. antagonist control, and microclimate control. Severity was recorded at 0, 1, 2, 3, and 6 days after the first inoculation using a zero four ordinal scale based on visible mycelial coverage and struc tural deterioration. Because the available dataset consisted of consolidated values by treatment and evaluation time, the results were analyzed using descriptive indicators rather than inferential statistics. The F. equiseti positive control showed the hig hest ordinal area under the visual severity curve (ASCPE = 22.0; 91.7% relative) and reached level 4 at 2 DDPI. The curative treatment recorded ASCPE = 21.0 (87.5% relative) and reached level 4 at 3 DDPI, whereas the preventive treatment recorded ASCPE = 1 7.5 (72.9% relative) and reached level 4 at 6 DDPI. Thus, these findings suggest that previous establishment of Trichoderma spp. visually delayed decay progression; however, the evidence should be interpreted as preliminary and descriptive. Keywords: biolo gical control; Fusarium equiseti ; fungal antagonism; molecular identification; ordinal severity; TEF . 1. Introducción El cultivo de fresa ( Fragaria × ananassa ) constituye un sistema hortofrutícola de alto valor económico, nutricional y comercial. Su natura leza altamente perecedera y su elevado contenido de agua la hacen especialmente susceptible al deterioro poscosecha causado por hongos fitopatógenos que colonizan tejidos vegetales bajo condiciones favorables de humedad y temperatura (Ramírez - Díaz & Villa - Ruano, 2024; Rajestary et al., 2023). Especies del género Fusarium adquieren relevancia por su capacidad de persistencia y adaptación en estructuras vegetales y por su potencial de inducir pudriciones bajo condiciones de inoculación artificial o poscosecha , con impacto negativo sobre la vida útil, la inocuidad y la aceptación del producto en el mercado (Ayoubi & Soleimani, 2016; Dwiastuti et al., 2021). Se requiere el desarrollo de estrategias de manejo sostenibles e integradas que reduzcan la dependencia d e fungicidas sintéticos e incluyan medidas de prevención y control en poscosecha, como el uso de compuestos naturales, agentes de biocontrol y tecnologías de conservación que limiten la colonización y el desarrollo de hongos fitopatógenos en frutos de fres a (Kumar et al., 2021; Ramírez - Díaz & Villa - Ruano, 2024; Yao et al., 2023). En condiciones poscosecha, estos patógenos pueden generar pérdidas relevantes y comprometer la calidad comercial del fruto (Dwiastuti et al., 2021; Rajestary et al., 2023).
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 138 El géne ro Trichoderma ha sido ampliamente estudiado como agente de control biológico (ACB) debido a su capacidad de competir por espacio y nutrientes, producir metabolitos antifúngicos, secretar enzimas hidrolíticas y ejercer micoparasitismo sobre hongos fitopatógenos (Dennis & Webster, 1971; Harman et al., 2004; Howell, 2003; Kottb et al., 2015; Vinale et al., 2008). En particular, Trichoderma se ha relacionado con mecanismos de antagonismo frente a Fusarium spp. y otros patógenos, lo que sustenta su uso potencial en sistemas agrícolas y hortícolas (Hussein et al., 2022; Mohiddin et al., 2021; Tyśkiewicz et al., 2022). Asimismo, la eficacia de Trichoderma spp. depende de factores biológicos y ambientales, entre ellos la presión de inóculo del patógeno, la viabilidad del antagon ista, la concentración aplicada, el tipo de tejido vegetal y el momento de aplicación (Poudel et al., 2023; Rahman et al., 2009). En este sentido, la aplicación preventiva puede favorecer el establecimiento previo del antagonista en el nicho disponible, mi entras que una aplicación posterior a la colonización del patógeno puede reducir la capacidad competitiva del biocontrolador (Naglot et al., 2015; Pastrana et al., 2016). En el caso particular de la fresa, gran parte de la investigación sobre control bioló gico se ha concentrado en suelo, raíz, corona o plántula. Estudios recientes han demostrado que Trichoderma spp. puede contribuir a reducir enfermedades radiculares y mejorar parámetros fisiológicos del cultivo (Li et al., 2024; Liu et al., 2024; Lombardi et al., 2020). No obstante, existe menor información sobre modelos descriptivos poscosecha que evalúen la progresión visible del deterioro en frutos inoculados artificialmente, pese a que la aplicación de antagonistas y sus compuestos volátiles ha mostrado potencial frente a patógenos poscosecha en otros frutos (Intana et al., 2021). En este contexto, el presente estudio tuvo como objetivo evaluar descriptivamente la progresión macroscópica de la severidad asociada a un aislamiento de Fusarium equiseti con afinidad molecular a Fusarium equiseti (identificación mediante barcoding TEF) y su interacción con una formulación comercial de Trichoderma spp. en frutos de fresa bajo condiciones controladas de laboratorio. Por consiguiente, se planteó como hipótesis de trabajo que la aplicación preventiva del antagonista retrasaría visualmente la progresión del deterioro en comparación con la aplicación curativa y el control positivo con F. equiseti . 2. Materiales y Métodos Diseño del estudio La investigación se desarrol ló bajo un enfoque experimental descriptivo - comparativo en condiciones controladas de laboratorio. El ensayo se estructuró con cinco tratamientos y una planificación de cinco repeticiones por tratamiento; cada repetición correspondió a una bandeja con cinc o frutos de fresa de calibre homogéneo y madurez comercial uniforme. Para evitar la pseudorreplicación, la bandeja se consideró la unidad experimental planificada y los frutos dentro de cada bandeja se consideraron subunidades de observación macroscópica. Para la presente versión del análisis, la matriz disponible corresponde a una clasificación ordinal consolidada por tratamiento y tiempo de evaluación, y no a valores individuales por
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 139 repetición. En consecuencia, el análisis se limitó a indicadores descrip tivos de progresión temporal y no se aplicaron pruebas inferenciales. De esta manera, se evita atribuir significancia estadística a datos que no contienen variabilidad experimental verificable. Área experimental y condiciones de incubación El experimento s e realizó en el Laboratorio de Biotecnología del campus universitario La María de la Universidad Técnica Estatal de Quevedo, ubicado en Los Ríos, Ecuador. Posteriormente, los frutos inoculados se mantuvieron en cámaras húmedas bajo condiciones controladas de temperatura de 25 ± 1 °C y humedad relativa de 90 95 %. De esta forma, dichas condiciones favorecieron el desarrollo micelial y permitieron simular un microclima propicio para la infección fúngica poscosecha. Material biológico Se utilizó un aislamiento activo de Fusarium equiseti , previamente reactivado en agar papa dextrosa (PDA) durante 7 10 días a 25 27 °C, hasta obtener crecimiento micelial vigoroso y producción visible de conidios. El aislamiento fue utilizado en este estudio como patógeno experime ntal para evaluar la progresión del deterioro bajo inoculación artificial en frutos de fresa. Como antagonista, se empleó una formulación comercial de Trichoderma spp. , registrada comercialmente como TRICHODERMA y comercializada por ANEC TJ, Quevedo, Los R íos, Ecuador. De acuerdo con la ficha técnica del producto, la formulación contiene Trichoderma spp. a una concentración declarada de 1 × 10⁸ UFC mL ¹, con pureza microbiológica ≥ 99 % y viabilidad ≥ 99 %. El producto se utilizó operativamente como formula ción líquida o suspensión comercial, se conservó a temperatura menor de 22 °C y se preparó bajo sombra antes de su aplicación experimental, conforme a las recomendaciones del proveedor. La ficha técnica no reporta especie, cepa, lote, fecha de caducidad ni origen del aislamiento; por tanto, el antagonista se reporta en este estudio como una formulación comercial de Trichoderma spp. Esta ausencia de información específica se reconoce como una limitación de trazabilidad biológica y reproducibilidad experiment al. Aislamiento e identificación molecular del patógeno El patógeno utilizado correspondió a un aislamiento fúngico obtenido originalmente de hojas infectadas de tomate con síntomas compatibles con infección por Fusarium . El material vegetal se desinfectó superficialmente con hipoclorito de sodio al 0,5 %, se lavó con agua destilada estéril, se secó sobre papel absorbente estéril y se fragmentó en secciones de aproximadamente 3 mm tomadas de la zona de transición entre tejido sano y enfermo. Los fragmentos se sembraron en PDA y, tras 7 a 10 días de incubación, el aislamiento emergente se purificó hasta obtener un cultivo homogéneo. La identificación molecular se realizó mediante barcoding del marcador TEF, con extracción de ADN, PCR usando los cebadores EF1 - 983F/EF1 - 2218R, secuenciación Sanger, ensamblaje bioinformático y comparación con GenBank del NCBI. El aislamiento presentó 98,10 % de identidad con Fusarium equiseti (accesión MK278902), una secuencia ensamblada de
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 140 1098 pb y calidad 79. El producto de PCR mostró una banda aproximada de 1200 pb en gel de agarosa al 1 %. No se realizó un análisis filogenético formal; por tanto, el aislamiento se reporta como Fusarium equiseti identificado por barcoding TEF. Estandarización de inóculos El inóculo de Fusarium equiseti se obtuvo a partir de cultivos puros desarrollados en agar papa dextrosa durante 7 10 días a 25 27 °C. La superficie del cultivo se raspó suavemente con material estéril y los conidios se suspendieron en agua destilada estéril. La suspensión se ho mogeneizó mediante agitación manual y se filtró a través de gasa estéril para reducir la presencia de fragmentos miceliales. Posteriormente, la concentración conidial se ajustó mediante conteo directo en cámara de Neubauer hasta alcanzar 1 × 10⁸ conidios m L ¹. De forma análoga, el inóculo de la formulación comercial de Trichoderma spp. se preparó a partir del cultivo reactivado en PDA. La biomasa fúngica se suspendió en agua destilada estéril, se homogeneizó y se ajustó a 1 × 10⁸ conidios mL ¹ m ediante cámara de Neubauer, con el propósito de mantener una concentración operativamente equivalente entre el patógeno y el antagonista. La viabilidad del antagonista se asumió a partir de la reactivación previa del producto y de la ficha técnica comerci al, la cual declara viabilidad ≥ 99 %; no obstante, no se realizó una prueba independiente de germinación conidial antes de la inoculación, por lo que este aspecto se reconoce como una limitación metodológica. Tratamientos experimentales A continuación, se evaluaron cinco tratamientos experimentales, definidos según el orden de inoculación del patógeno y del antagonista. Para evaluar la interacción entre Fusarium equiseti y Trichoderma spp. en frutos de fresa se establecieron cinco tratamientos. En el trata miento curativo (postinoculación), los frutos se inocularon inicialmente con F. equiseti y, 48 h después, se aplicó la formulación comercial de Trichoderma spp. En el tratamiento preventivo, la aplicación de Trichoderma spp. se realizó antes de la inoculac ión con F. equiseti , con un intervalo de 48 h entre ambas aplicaciones. Además, se incluyeron un control positivo con inoculación exclusiva de F. equiseti , un control antagonista con inoculación exclusiva de Trichoderma spp. y un control de microclima con agua destilada estéril más Tween 20 al 0,02 % v/v. Procedimiento de inoculación En cada fruto se realizó una lesión superficial estandarizada de aproximadamente 0,5 mm de profundidad con material estéril, con el propósito de favorecer la entrada del inócul o y homogeneizar el sitio de infección. Posteriormente, se aplicó 1 mL de la suspensión correspondiente sobre la zona lesionada mediante micropipeta. La aplicación se efectuó de forma localizada y gradual para reducir el escurrimiento superficial. En los t ratamientos secuenciales T1 y T2, la segunda aplicación se realizó 48 h después de la primera, de acuerdo con el esquema experimental previamente descrito.
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 141 Dado que el volumen aplicado pudo resultar elevado para frutos de fresa, este aspecto se reconoce co mo una limitación metodológica, especialmente ante la posibilidad de escurrimiento no cuantificado sobre la superficie del fruto o hacia la bandeja. En estudios posteriores se recomienda reducir el volumen de inoculación y documentar con mayor precisión la retención del inóculo en la zona lesionada. Evaluación de severidad La severidad macroscópica se evaluó a los 0, 1, 2, 3 y 6 días después de la primera inoculación (DDPI) . Los cuatro primeros registros se realizaron en días consecutivos, mientras que el q uinto se efectuó después de un intervalo extendido. Por esta razón, la progresión temporal se expresa en días después de la primera inoculación y no como una serie diaria continua hasta el final del ensayo. En los tratamientos secuenciales T1 y T2, la segu nda inoculación se realizó 48 h después de la primera. En T1, la primera inoculación correspondió a Fusarium equiseti y la segunda a la formulación comercial de Trichoderma spp.; en T2, la primera inoculación correspondió a Trichoderma spp. y la segunda a F. equiseti. Esta precisión permite interpretar la progresión de la severidad en función del inicio experimental de cada tratamiento. En cada tiempo de evaluación se registraron fotografías estandarizadas de las unidades experimentales para documentar la progresión visual de la colonización fúngica y del deterioro estructural del fruto. La severidad se clasificó mediante una escala ordinal cualitativa de 0 a 4, adaptada de escalas empíricas utilizadas en estudios de deterioro poscosecha de fr utos de fresa, las cuales estiman la severidad según el porcentaje de superficie afectada y la presencia de signos visibles de colonización fúngica. En este estudio, los niveles se definieron con base en la cobertura micelial visible y el deterioro estruct ural del fruto, debido a que la evaluación se realizó mediante observación macroscópica de fotografías experimentales (Tabla 1). Estudios previos en fresa han empleado escalas ordinales similares para clasificar la severidad de pudriciones poscosecha, aunq ue generalmente con seis niveles de severidad (Kahramanoğlu et al., 2022; Rajestary et al., 2023). Tabla 1 Escala ordinal utilizada para clasificar la severidad visual de la colonización y el deterioro del fruto. Nivel Criterio de clasificación 0 Ausencia de colonización visible. 1 Colonización inicial localizada (< 25 % de la superficie). 2 Colonización moderada (25 50 %) sin colapso estructural. 3 Colonización extensa (50 75 %) con deterioro evidente.
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 142 Nivel Criterio de clasificación 4 Cobertura total (> 75 %) y colapso estructural del fruto. Nota . Los valores corresponden a una escala ordinal cualitativa de 0 a 4, adaptada de escalas empíricas empleadas para evaluar severidad de deterioro poscosecha en frutos de fresa mediante porcentaje de superficie afectada y presenc ia de esporulación visible (Kahramanoğlu et al., 2022; Rajestary et al., 2023). En este estudio, la escala se ajustó a cinco niveles con base en cobertura micelial visible y deterioro estructural del fruto. No representa una medición continua ni una escala diagramática validada específicamente para la interacción Fusarium equiseti fresa. Variables complementarias y análisis descriptivo Además de la severidad ordinal, se registraron observaciones cualitativas sobre cambios cromáticos del micelio, presencia de exudado y pérdida aparente de firmeza. La variación de peso no se incorporó como resultado cuantitativo porque no se dispone de valores individuales por repetición. El análisis descriptivo se basó en cuatro indicadores: severidad ordinal por t ratamiento y tiempo de evaluación, área bajo la curva de severidad visual ordinal (ASCPE, equivalente ordinal del área bajo la curva de progreso de la enfermedad [AUDPC]), ASCPE relativa y primer tiempo en que cada tratamiento alcanzó severidad crítica (ni vel ≥ 3) o severidad máxima (nivel 4). La ASCPE se calculó mediante integración trapezoidal a partir de los tiempos 0, 1, 2, 3 y 6 DDPI, con el fin de considerar el intervalo desigual entre las evaluaciones finales. Cabe precisar que estos indicadores no r epresentan medias estadísticas ni sustituyen el análisis inferencial, pero permiten comparar descriptivamente la velocidad visual de deterioro entre tratamientos. Para preservar la trazabilidad del análisis, las fotografías se utilizaron como soporte docum ental de la clasificación ordinal. La edición digital reportada se restringió a la limpieza del fondo externo y no modificó el contenido biológico de las bandejas; por tanto, las imágenes deben interpretarse como evidencia visual complementaria y no como m edición cuantitativa automatizada. 3. Resultados Identificación molecular del aislamiento fúngico El análisis molecular indicó afinidad taxonómica del aislamiento con Fusarium equiseti mediante el marcador TEF. La secuencia ensamblada presentó 1098 pb, cal idad 79 y 98,10 % de identidad frente a la accesión MK278902 de GenBank. Asimismo, la amplificación por PCR generó una banda aproximada de 1200 pb en gel de agarosa al 1 %, con control negativo incluido, lo que respaldó la calidad del producto amplificado para la secuenciación (Figura 1).
Multidisciplinary Collaborative Journal 0XOWLGLVFLSOLQDU\&ROODERUDWLYH-RXUQDO _9RO _1~P _ -XO 6HS _ _KWWSVPFMRXUQDOHGLWRULDOGRVRFRP Figura 1 Gel de agarosa al 1 % con productos de PCR para el fragmento TEF. Nota 6HREVHUYDXQDEDQGDGHDSUR[LPDGDPHQWHSEHQODPXHVWUD+00 PDUFDGRUGHSHVRPROHFXODU&1 FRQWUROQHJDWLYR )XHQWHLQIRUPHWpFQLFRH[WHUQR$ Progresión temporal de la severidad /DHVFDODRUGLQDOSHUPLWLyGHVFULELUSDWURQHVGLIHUHQFLDGRVGHFRORQL]DFLyQYLVLEOH\ GHWHULRURHVWUXFWXUDOHQWUHWUDWDPLHQWRV(QFRQMXQWRODFODVLILFDFLyQSRUWUDWDPLHQWR\ WLHPS RGHHYDOXDFLyQVHUHVXPHHQOD7DEODPLHQWUDVTXHODSURJUHVLyQIRWRJUiILFD\OD WHQGHQFLDWHPSRUDOVHSUHVHQWDQHQODV)LJXUDV\ Tabla 2 &ODVLILFDFLyQGHVHYHULGDGYLVXDOHQIUXWRVGHIUHVDHYDOXDGRVPHGLDQWHHVFDODRUGLQDO Tratamiento 0 DDPI 1 DDPI 2 DDPI 3 DDPI 6 DDPI 7&XUDWLYR 73UHYHQWLYR 7 Fusarium equiseti 77ULFKRGHUPDVSS
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 144 Tratamiento 0 DDPI 1 DDPI 2 DDPI 3 DDPI 6 DDPI T5 Microclima 0 1 1 2 3 Nota . DDPI = días después de la primera inoculación. Los valores corresponden a una escala ordinal 0 4; no representan medias estadísticas ni resultados inferenciales. En 0 DDPI, el control positivo con Fusarium equiseti y el tratamiento curativo presentaron se veridad nivel 2. En contraste, el tratamiento preventivo y el control antagonista con Trichoderma spp. se ubicaron en nivel 1, mientras que el control de microclima permaneció en nivel 0. A 1 DDPI, el control positivo y el tratamiento curativo alcanzaron n ivel 3, mientras que el tratamiento preventivo ascendió a nivel 2. A 2 DDPI, el control positivo con F. equiseti alcanzó nivel 4, caracterizado por cobertura micelial superior al 75 % y colapso estructural. En cambio, los tratamientos curativo y preventivo permanecieron en nivel 3. A 3 DDPI, el tratamiento curativo alcanzó nivel 4, mientras que el tratamiento preventivo continuó en nivel 3. Finalmente, a 6 DDPI, los tratamientos curativo, preventivo y control positivo coincidieron en nivel 4, aunque la prog resión fue más temprana en el control positivo y más retardada en el tratamiento preventivo. Figura 2 Evolución macroscópica por tratamiento en frutos de fresa. Nota. Las imágenes corresponden a registros representativos de 0, 2 y 6 DDPI para los tratamientos T1 a T5. DDPI = días después de la primera inoculación. Los tiempos intermedios de 1 y 3 DDPI fueron revisados para verificar la secuencia, pero se omitieron por concisión visual. Fuente: elaboración propia.
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 145 Figura 3 Tendencia temporal descrip tiva de la severidad visual en frutos de fresa inoculados con Fusarium equiseti y Trichoderma spp. Nota. DDPI = días después de la primera inoculación. Los valores corresponden a una escala ordinal 0 4; no representan medias estadísticas ni resultados inferenciales. Elaboración propia. Indicadores descriptivos de progresión El área bajo la curva de severidad visual ordinal (ASCPE) permitió resumir la progresión del deterioro durante el periodo de observación y ponderar el intervalo desigual e ntre 3 y 6 DDPI. El control positivo con F. equiseti presentó la mayor ASCPE ordinal (22,0; 91,7 % relativa). La aplicación curativa registró una ASCPE de 21,0 (87,5 % relativa), mientras que la aplicación preventiva registró 17,5 (72,9 % relativa). En los controles, T4 Trichoderma spp. registró 15,0 (62,5 % relativa) y T5 microclima 10,5 (43,8 % relativa). Estos indicadores se sintetizan en la Tabla 3. Tabla 3 Indicadores descriptivos de área bajo la curva de severidad visual ordinal y transición hacia niv eles críticos. Tratamiento ASCPE ordinal ASCPE relativa (%) Primer DDPI con nivel ≥ 3 Primer DDPI con nivel 4 Interpretación T1 Curativo 21,0 87,5 1 3 Deterioro rápido pese a la aplicación posterior del antagonista. T2 Preventivo 17,5 72,9 2 6 Retraso visual relativo hacia severidad máxima.
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 146 T3 F. equiseti 22,0 91,7 1 2 Mayor progreso visual del deterioro. T4 Trichoderma spp. 15,0 62,5 3 No alcanzó Colonización visible sin nivel máximo. T5 Microclima 10,5 43,8 6 No alcanzó Deterioro progresivo asociado al microclima húmedo. Nota. ASCPE = área bajo la curva de severidad visual ordinal. La ASCPE se calculó mediante integración trapezoidal a partir de los tiempos 0, 1, 2, 3 y 6 DDPI. La ASCPE relativa se estimó respecto al valor máximo posible de 24 unidades ordinales - día. Los valores son descriptivos y no representan inferencia estadística. Comparación descriptiva entre aplicación preventiva y curativa La comparación entre los tratamientos secuenciales mostró que la aplicación preventiv a (T2) retrasó visualmente la transición hacia niveles críticos de severidad respecto a la aplicación curativa (T1). En concreto, T1 alcanzó el nivel 4 a 3 DDPI, mientras que T2 alcanzó dicho nivel a 6 DDPI. Frente al control positivo con F. equiseti , que alcanzó nivel 4 a 2 DDPI, la aplicación preventiva mostró un retraso visual relativo de cuatro días después de la primera inoculación. Por su parte, el control antagonista con Trichoderma spp. alcanzó nivel 3 a 3 DDPI y no alcanzó nivel 4. Este patrón sugiere colonización del tejido por el antagonista bajo condiciones de alta humedad, pero sin el colapso máximo observado en los tratamientos que incluyeron F. equiseti . En cambio, el control de m icroclima alcanzó nivel 3 a 6 DDPI, lo que evidencia que las condiciones de incubación también favorecieron el deterioro natural del fruto. Variables complementarias Adicionalmente, la presencia de exudado, la pérdida aparente de firmeza y los cambios crom áticos del micelio acompañaron la progresión de severidad. En los tratamientos con F. equiseti predominó una colonización blanquecina inicial asociada con deterioro rápido del tejido, mientras que en el tratamiento con Trichoderma spp. se observó colonizac ión verdosa a oscura, compatible con el crecimiento del antagonista. Cabe señalar que estas observaciones deben interpretarse como complementarias, debido a que no se cuantificaron instrumentalmente la firmeza, la pérdida de peso, la carga conidial ni el c recimiento microbiano por repetición. 4. Discusión Los resultados muestran que Fusarium equiseti colonizó rápidamente los frutos de fresa bajo condiciones de alta humedad relativa, dado que el control positivo alcanzó el nivel máximo de severidad a 2 DDPI. Esta respuesta es coherente con la capacidad de especies de Fusarium para desarrollarse bajo condiciones favorables de humedad, temperatura y disponibilidad de tejido susceptible (Kumar et al., 2021; Yao et al., 2023).
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 147 La capacidad de Fusarium equiseti pa ra colonizar y deteriorar frutos de fresa encuentra respaldo en reportes previos específicos para este cultivo. Ayoubi y Soleimani (2016) identificaron F. equiseti entre aislamientos de Fusarium asociados a fresa en Irán y evaluaron su patogenicidad en pla ntas y frutos, por lo que dicho antecedente refuerza la interpretación de que esta especie puede comportarse como fitopatógeno oportunista en tejidos de Fragaria × ananassa . No obstante, la interpretación del presente ensayo debe conservar un enfoque prude nte, ya que el aislamiento utilizado procedió de tomate y fue aplicado sobre frutos de fresa mediante inoculación artificial; por tanto, los resultados demuestran capacidad de deterioro bajo condiciones controladas, pero no prueban ocurrencia epidemiológic a natural en sistemas comerciales de fresa. Asimismo, la identificación molecular del aislamiento como F. equiseti fortalece la trazabilidad biológica del ensayo y reduce la incertidumbre taxonómica asociada al uso genérico de Fusarium spp. Este aspecto es relevante porque las especies del género pueden diferir en agresividad, capacidad de colonización, producción de metabolitos y comportamiento poscosecha. Sin embargo, dado que el aislamiento fue obtenido originalmente de tomate y evaluado experimentalment e sobre fresa, los resultados deben interpretarse como evidencia de capacidad de deterioro bajo inoculación artificial y no como demostración epidemiológica de ocurrencia natural de F. equiseti en frutos de fresa. En cuanto a la aplicación curativa de Tric hoderma spp. , los frutos alcanzaron nivel 4 de severidad a 3 DDPI. Este patrón sugiere que, una vez iniciado el establecimiento visible del patógeno, el antagonista puede tener menor capacidad para desplazarlo o limitar su expansión macroscópica. En efecto , la literatura sobre control biológico indica que la eficacia de Trichoderma spp. puede depender del momento de aplicación y de la ocupación previa del nicho ecológico (Pastrana et al., 2016; Rahman et al., 2009). En contraste, la aplicación preventiva de Trichoderma spp. retrasó visualmente la progresión hacia severidad máxima hasta 6 DDPI. Este comportamiento es compatible con la hipótesis de establecimiento previo del antagonista, que podría favorecer la competencia por espacio y nutrientes o la producc ión de metabolitos antifúngicos. No obstante, estos mecanismos no fueron medidos directamente en el presente ensayo; por tanto, deben discutirse como explicaciones plausibles y no como resultados demostrados experimentalmente (Harman et al., 2004; Howell, 2003; Vinale et al., 2008). De hecho, la liberación de compuestos orgánicos volátiles por especies de Trichoderma ha demostrado inhibir el crecimiento de Fusarium en frutos poscosecha (Intana et al., 2021), y formulaciones de Trichoderma han mostrado efect os de biocontrol y promoción de crecimiento en fresa (Li et al., 2024). Por otro lado, el control antagonista alcanzó nivel 3 a 3 DDPI, lo que indica que Trichoderma spp. colonizó el tejido bajo condiciones de alta humedad. Esta observación no debe interpr etarse como patogenicidad del antagonista, sino como crecimiento saprofítico sobre un sustrato altamente perecedero. Al respecto, Trichoderma spp. se caracteriza por su alta capacidad de colonización, producción de metabolitos y adaptación a diferentes nic hos, rasgos que explican su comportamiento en sistemas de biocontrol (Khan et al., 2020; Tyśkiewicz et al., 2022).
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 148 Igualmente, el deterioro observado en el control de microclima evidencia que la humedad relativa elevada también favoreció cambios poscosecha naturales. Este resultado es metodológicamente relevante porque demuestra que la severidad visual no depende únicamente del microorganismo inoculado, sino también del estado fisiológico del fruto, la lesión previa y las condiciones de incubación. En estud ios poscosecha, la humedad elevada puede favorecer el ablandamiento, el exudado y la proliferación microbiana oportunista (Batta, 2007; González - Estrada et al., 2018). Desde una perspectiva aplicada, el resultado más relevante es el retraso temporal observ ado en el tratamiento preventivo. Aun así, el antagonista no evitó completamente el colapso estructural a 6 DDPI. Por ello, el uso de Trichoderma spp. en frutos de fresa debe considerarse una estrategia potencialmente complementaria dentro de programas de manejo integrado, más que una solución única bajo alta presión de inóculo o humedad relativa elevada (Dwiastuti et al., 2021; Liu et al., 2024; Lombardi et al., 2020; Poudel et al., 2023). Limitaciones del estudio El estudio presenta limitaciones que deben considerarse al interpretar los resultados. En primer lugar, la variable principal fue ordinal y cualitativa; además, la matriz disponible corresponde a valores consolidados por tratamiento y tiempo de evaluación, sin datos individua les por repetición. En consecuencia, no es adecuado afirmar diferencias significativas entre tratamientos ni realizar inferencias estadísticas. A unque el aislamiento utilizado fue con afinidad molecular a Fusarium equiseti (identificación mediante barcodin g TEF) su origen fue hoja infectada de tomate y no fresa. Por tanto, el ensayo no permite afirmar que dicho aislamiento represente poblaciones naturales de F. equiseti asociadas a fresa en campo o poscosecha comercial. Además, no se incluyeron pruebas comp lementarias de patogenicidad comparativa entre aislamientos de distinto origen ni reaislamiento molecular desde los frutos inoculados al final del ensayo. E l ensayo se desarrolló bajo condiciones controladas de laboratorio y con un periodo corto de observa ción, por lo que los resultados no pueden extrapolarse directamente a campo, almacenamiento comercial o sistemas poscosecha con variaciones de temperatura y humedad. En este sentido, estudios posteriores deberían incorporar datos por repetición, reaislamie nto microbiológico y molecular desde frutos inoculados, comparación con aislamientos de Fusarium obtenidos de fresa, mediciones instrumentales de calidad poscosecha y análisis estadístico apropiado para variables ordinales o cuantitativas. 5. Conclusiones Bajo las condiciones controladas del ensayo, el control positivo con Fusarium equiseti presentó la progresión macroscópica más rápida de severidad en frutos de fresa, alcanzando el nivel máximo a 2 DDPI y registrando la mayor ASCPE ordinal. La aplicación p reventiva de la formulación comercial de Trichoderma spp. retrasó la aparición de severidad máxima hasta 6 DDPI, mientras que la aplicación curativa alcanzó nivel 4 a 3 DDPI. Estos resultados sugieren que el momento de aplicación del antagonista influyó en
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 149 la progresión visual del deterioro; sin embargo, el efecto observado fue principalmente retardante, ya que la aplicación preventiva no evitó el deterioro avanzado al final del periodo evaluado. El control de microclima presentó deterioro progresivo, lo qu e confirma la influencia de la humedad y del estado fisiológico del fruto sobre la severidad visual. Los hallazgos deben interpretarse como evidencia preliminar descriptiva. Se recomienda validar estos resultados mediante ensayos con matriz completa por re petición, reaislamiento microbiológico y molecular desde los frutos inoculados, comparación con aislamientos de Fusarium procedentes de fresa, verificación documental o molecular del antagonista, cuantificación microbiológica, mediciones instrumentales de calidad poscosecha y análisis estadístico apropiado para datos ordinales o cuantitativos. Contribución de los autores: CYMS: Conceptualización, metodología, investigación, validación, aislamiento e identificación molecular del patógeno, análisis formal, vi sualización y redacción revisión y edición. MSCP: Conceptualización, metodología, investigación, curación de datos, redacción borrador original y supervisión. JATR: Conceptualización, análisis formal, visualización y redacción revisión y edición. CVM C: Investigación, validación experimental, revisión y edición. RYHF: Análisis formal, visualización y redacción revisión y edición. Todos los autores han leído, revisado y aprobado la versión final del manuscrito. Agradecimientos : Los autores agradecen al Laboratorio de Biotecnología de la Universidad Técnica Estatal de Quevedo por el apoyo brindado para el desarrollo del ensayo experimental. De manera especial, expresan su reconocimiento a Gamarra Verá Norelys Mayli y Seme Zúñiga Jacinta Alexa ndra por su colaboración en las actividades vinculadas con la ejecución del estudio. Conflicto de intereses : Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses. Financiamiento : No se reportó financiamiento externo específico para la ejecución de e ste estudio. Disponibilidad de datos : Los registros fotográficos, la matriz de severidad ordinal consolidada y el informe técnico externo de identificación molecular del aislamiento se encuentran disponibles a solicitud razonable al autor de correspondenci a. La matriz individual por repetición no estuvo disponible para esta versión del análisis; por ello, los resultados se presentan como descriptivos y no inferenciales. Referencias bibliográficas Ayoubi, N., & Soleimani, M. J. (2016). Morphological and mole cular identification of pathogenic Fusarium spp. on strawberry in Iran. Sydowia, 68, 163 171. https://doi.org/10.12905/0380.sydowia68 - 2016 - 0163
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 150 Batta, Y. A. (2007). Control of postharvest diseases of fruit with an invert emulsion formulation of Trichoderma harzianum Rifai. Postharvest Biology and Technology, 43(1), 143 150. https://doi.org/10.1016/j.postharvbio.2006.07.010 Dennis, C., & Webster, J. (1971). Antagonistic properties of species - groups of Trichoderma. I. Production of non - volatile antibiotics. Transactions of the British Mycological Society, 57(1), 25 39. https://doi.org/10.1016/S0007 - 1536(71)80077 - 3 Dwiastuti, M. E., Soesanto, L., Aji, T. G., Devy, N. F., & Hardiyanto. (2021). Biological control strategy for postharvest diseases of citrus, apples, grapes and strawberries fruits and application in Indonesia. Egyptian Journal of Biological Pest Control, 31(1), 141. https://doi.org/10.1186/s41938 - 021 - 0048 8 - 1 González - Estrada, R., Blancas - Benítez, F. J., Montaño - Leyva, B., Moreno - Hernández, C. L., Romero - Islas, L. C., Romero - Islas, J., Avila - Peña, R., Ramos - Guerrero, A., Fonseca - Cantabrana, A., & Gutiérrez - Martínez, P. (2018). A review study on the posthar vest decay control of fruit by Trichoderma. En Trichoderma: The most widely used fungicide. IntechOpen. https://doi.org/10.5772/intechopen.82784 Harman, G. E., Howell, C. R., Viterbo, A., Chet, I., & Lorito, M. (2004). Trichoderma species opportunistic, avirulent plant symbionts. Nature Reviews Microbiology, 2(1), 43 56. https://doi.org/10.1038/nrmicro797 Howell, C. R. (2003). Mechanisms employed by Trichoderma species in the biological control of plant diseases: The history and evolution of current concepts. Plant Disease, 87(1), 4 10. https://doi.org/10.1094/PDIS.2003.87.1.4 Hussein, N. A., Al - Janabi, H. J. K., Al - Mashhady, F. R., Al - Janabi, J. K. A., & Al - Shujairi, A. R. S. (2022). Antagonistic activities of bioagent fungi Trichoderma harzianum and Pleurotus ostreatus against three species of Fusarium in cucumber plants. Asia Pacific Journal of Molecular Biology and Biotechnology, 30(1), 12 21. https://doi.org/10.35118/apjmbb.2022.030.1.02 Intana, W., Kheawleng, S., & Sunpapao, A. (2021). Trichoderma asperellum T76 - 14 released vol atile organic compounds against postharvest fruit rot in muskmelons (Cucumis melo) caused by Fusarium incarnatum. Journal of Fungi, 7(1), 46. https://doi.org/10.3390/jof7010046 Kahramanoğlu, İ., Panfilova , O., Genç Kesimci, T., Usanmaz Bozhüyük, A., Gürbüz, R., & Alptekin, H. (2022). Control of postharvest gray mold at strawberry fruits caused by Botrytis cinerea and improving fruit storability through Origanum onites L. and Ziziphora clinopodioides L. vol atile essential oils. Agronomy, 12(2), 389. https://doi.org/10.3390/agronomy12020389
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 151 Khan, R. A. A., Najeeb, S., Hussain, S., Xie, B., & Li, Y. (2020). Bioactive secondary metabolites from Trichoder ma spp. against phytopathogenic fungi. Microorganisms, 8(6), 817. https://doi.org/10.3390/microorganisms8060817 Kottb, M., Gigolashvili, T., Großkinsky, D. K., & Piechulla, B. (2015). Trichoder ma volatiles effecting Arabidopsis: From inhibition to protection against phytopathogenic fungi. Frontiers in Microbiology, 6, 995. https://doi.org/10.3389/fmicb.2015.00995 Kumar, J., Kumar, M., Tomar, A., Vaishali, Kumar, P., & Chand, P. (2021). Morphological and molecular characterization of Trichoderma spp. from rhizosphere soil and their antagonistic activity against Fusarium spp. International Journal of Plant & Soil Science, 33(19), 100 112. https://doi.org/10.9734/ijpss/2021/v33i1930605 Li, W., Fu, Y., Jiang, Y., Hu, J., Wei, Y., Li, H., Li, J., Yang, H., & Wu, Y. ( 2024). Synergistic biocontrol and growth promotion in strawberries by co - cultured Trichoderma harzianum TW21990 and Burkholderia vietnamiensis B418. Journal of Fungi, 10(8), 551. https://doi.org/10.3390/j of10080551 Liu, P., Yang, R., Wang, Z., Ma, Y., Ren, W., Wei, D., & Ye, W. (2024). Biocontrol potential of Trichoderma asperellum CMT10 against strawberry root rot disease. Horticulturae, 10(3), 246. https://doi.org/10.3390/horticulturae10030246 Lombardi, N., Caira, S., Troise, A. D., Scaloni, A., Vitaglione, P., Vinale, F., Marra, R., Salzano, A. M., Lorito, M., & Woo, S. L. (2020). Trichoderma applications on strawberry plants modulate the ph ysiological processes positively affecting fruit production and quality. Frontiers in Microbiology, 11, 1364. https://doi.org/10.3389/fmicb.2020.01364 Mohiddin, F. A., Padder, S. A., Bhat, A. H., Ah anger, M. A., Shikari, A. B., Wani, S. H., Bhat, F. A., Nabi, S. U., Hamid, A., Bhat, N. A., & Abdel Latef, A. A. H. (2021). Phylogeny and optimization of Trichoderma harzianum for chitinase production: Evaluation of their antifungal behaviour against the prominent soil - borne phytopathogens of temperate India. Microorganisms, 9(9), 1962. https://doi.org/10.3390/microorganisms9091962 Naglot , A., Goswami, S., Rahman, I., Shrimali, D. D., Yadav, K. K., Gupta, V. K., Rabha, A. J., Gogoi, H. K., & Veer, V. (2015). Antagonistic potential of native Trichoderma viride strain against potent tea fungal pathogens in North East India. The Plant Patholo gy Journal, 31(3), 278 289. https://doi.org/10.5423/PPJ.OA.01.2015.0004 Pastrana, A. M., Basallote - Ureba, M. J., Aguado, A., Akdi, K., & Capote, N. (2016). Biological control of strawberry soil - b orne pathogens Macrophomina phaseolina and Fusarium solani, using Trichoderma asperellum and Bacillus spp. Phytopathologia Mediterranea, 55(1), 109 120. https://doi.org/10.14601/Phytopatho l_Mediterr - 16363
Multidisciplinary Collaborative Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 4 | Núm.0 3 | Jul Sep | 202 6 | https://mcjournal.editorialdoso.com 152 Poudel, S., Khanal, P., C, B. K., Pokharel, S., & Gauli, S. (2023). Biological control of fungal phytopathogens with Trichoderma harzianum and its fungicidal compatibility. International Journal of Applied Biology, 7(1), 47 58. https://doi.org/10.20956/ijab.v7i1.26502 Rahman, M. A., Begum, M. F., & Alam, M. F. (2009). Screening of Trichoderma isolates as a biological control agent against Ceratocystis paradoxa causing pineapple dise ase of sugarcane. Mycobiology, 37(4), 277 285. https://doi.org/10.4489/MYCO.2009.37.4.277 Rajestary, R., Landi, L., & Romanazzi, G. (2023). Effects of commercial natural compounds on postharvest d ecay of strawberry fruit. Coatings, 13(9), 1515. https://doi.org/10.3390/coatings13091515 Ramírez - Díaz, C., & Villa - Ruano, N. (2024). Impacto del cultivo de la fresa (Fragaria × ananassa) en el sect or agroalimentario y su manejo sostenible. Alianzas y Tendencias BUAP, 9(36), 51 75. https://doi.org/10.5281/zenodo.14545422 Tyśkiewicz, R., Nowak, A., Ozimek, E., & Jaroszuk - Ściseł, J. (2022). Trichoderma: The current status of its application in agriculture for the biocontrol of fungal phytopathogens and stimulation of plant growth. International Journal of Molecular Sciences, 23(4), 2329. ht tps://doi.org/10.3390/ijms23042329 Vinale, F., Sivasithamparam, K., Ghisalberti, E. L., Marra, R., Woo, S. L., & Lorito, M. (2008). Trichoderma plant pathogen interactions. Soil Biology and Biochemistry, 40(1), 1 10. https://doi.org/10.1016/j.soilbio.2007.07.002 Yao, X., Guo, H., Zhang, K., Zhao, M., Ruan, J., & Chen, J. (2023). Trichoderma and its role in biological control of plant fungal and nematode disease. Frontiers in Microbiology, 14, 1 160551. https://doi.org/10.3389/fmicb.2023.1160551