Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol . 0 3 | Núm . 0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com ISSN: 3073 - 1356 92 Articulo Trichoderma spp. en la propagación sostenible de Theobroma cacao L. bajo distintos sustratos Trichoderma spp. in the Sustainable Propagation of Theobroma cacao L. under Different Substrates Mercedes Susana Carranza Patiño 1 , * , Vanessa Carolina Rivera Castillo 2 , Carmen Victoria Marín Cuevas 3 , Juan Antonio Torres Rodríguez 4 y Ángel Virgilio Cedeño Moreira 5 1 Universidad Técnica Estatal de Quevedo, Ecuador, Quevedo ; https://orcid.org/0000 - 0002 - 0917 - 0415 2 Universidad Técnica Estatal de Quevedo, Ecuador, Quevedo ; https://orcid.org/0009 - 0005 - 0697 - 8100 ; vanessa.rivera2015@uteq.edu.ec 3 Universidad Técnica Estatal de Quevedo, Ecuador, Quevedo; https://orcid.org/0000 - 0002 - 8128 - 9170 ; cmarin@uteq.edu.ec 4 Universidad Técnica Estatal de Quevedo, Ecuador, Quevedo; https://orcid.org/0000 - 0003 - 3326 - 4371 ; jatorres@uteq.edu.ec 5 Universidad Técnica Estatal de Quevedo, Ecuador, Quevedo; https://orcid.org/0000 - 0002 - 6564 - 5569 ; acedenom@uteq.edu.ec * Correspondencia : mcarranza@uteq.edu.ec https://doi.org/10.70881/mcj/v3/n2/52 Resumen: El uso de Trichoderma spp. representa una alternativa sostenible para mejorar la propagación de plántulas de Theobroma cacao L. Este estudio evaluó el efecto de cepas seleccionadas de Trichoderma spp. sobre la germinación y crecimiento inicial del cacao Nacional, bajo diferentes sustratos en condiciones de vivero. Se aplicaron cuatro cepas ( T. harzianum cepas 1 y 2, T. reesei y T. viride ), además de un control, en tres mezclas de sustratos: tierra de monte + abono orgánico, tierra de monte + perlita y tierra de monte + turba. La germinación de las semillas fue alta (100%) en todos los tratamientos. Sin embargo, la supervivencia de plántulas mejoró notablemente con el uso de turba (>90%) frente al sustrato tierra de monte + abono (52,5%). En cuanto al crecimiento, T. viride en perlita promovió un mayor peso radicular fresco (12,18 g) y seco (6,91 g), además de una mayor altura (38 ,31 cm). Asimismo, T. viride en turba generó la mayor biomasa aérea fresca (16,05 g) y seca (9,19 g). Los resultados confirman que la inoculación con Trichoderma spp., en combinación con sustratos adecuados, fortalece el crecimiento inicial de las plántula s de cacao, lo que aumenta su vigor y potencial productivo en sistemas agroecológicos sostenibles. La elección adecuada de cepa y sustrato es clave para mejorar la eficiencia y sostenibilidad en viveros de cacao, lo que contribuye a una agricultura de alto rendimiento con menor dependencia de insumos químicos. Palabras clave : Biocontroladores; microbiota rizosférica; fitomejoramiento sostenible; interacción planta - microorganismo; producción de plántulas . Abstract: The use of Trichoderma spp. represents a sustainable alternative to improve the propagation of Theobroma cacao L. seedlings. This study evaluated the effect of selected Trichoderma spp. strains on the germination and initial growth of Nacional cacao under different substrates i n nursery conditions. Four strains ( T. harzianum strains 1 and 2, T. reesei , and T. viride ), as well as a control, were applied to three substrate mixtures: forest Cita: Carranza Patiño, M. S., Rivera Castillo, V. C., Marín Cuevas, C. V., Torres Rodríguez, J. A., & Cedeño Moreira, A. V. (2025). Trichoderma spp. en la propagación sostenible de Theobroma cacao L. bajo distintos sustratos. Multidisciplinary Collaborative Journal , 3 (2), 92 - 113. https://doi.org/10.70881/mcj/ v3/n2/52 Recibido: 20 / 03 /20 25 Revisado: 10 / 04 /20 25 Aceptado: 15 / 04 /20 25 Publicado: 2 4 / 04 /20 25 Copyright: © 202 5 por los autores . Este artículo es un artículo de acceso abierto distribuido bajo los términos y condiciones de la Licencia Creative Commons, Atribución - NoComercial 4.0 Internacional. ( CC BY - NC ) . ( https://creativecommons.org/lice nses/by - nc/4.0/ )
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 93 soil + organic compost, forest soil + perlite, and forest soil + peat. Seed germination was high (100%) in all treatments. However, seedling survival significantly improved with the use of peat (>90%) compared to forest soil + compost (52.5%). In terms of growth, T. viride in perlite promoted greater fresh root weight (12.18 g) and dry root weight (6.91 g), as well as greater seedling height (38.31 cm). Similarly, T. viride in peat generated the highest shoot fresh biomass (16.05 g) and dry biomass (9.19 g) . The results confirm that inoculation with Trichoderma spp., in combination with suitable substrates, enhances the initial growth of cacao seedlings, increasing their vigor and productive potential in sustainable agroecological systems. The appropriate se lection of strain and substrate is key to improving efficiency and sustainability in cacao nurseries, contributing to high - performance agriculture with lower dependence on chemical inputs . Keywords: Biocontrol agents; rhizospheric microbiota; sustainable crop improvement; plant microorganism interaction; seedling production 1. Introducción El cultivo del cacao Nacional Fino de Aroma es el primer factor que fortalece la agricultura ecuatoriana (Valdez, 2021) . El Theobroma cacao L. representa la diversidad agrícola de la nación y es un pilar económico clave. Su importancia radica en la calidad gourmet que aportan al mercado mundial, especialmente en la industria del chocolate fino (Gómez & Rocha, 2018) . El cacao Nacional no solo posee atributos organolépticos valorados internacionalmente, sino que también representa una fuente de diversidad genética endémica con alto potencial de resiliencia frente a estreses bióticos y abióticos (Thomas et al., 2024) . En adición, la Unión Europea establece restricciones específicas sobre el contenido de cadmio, lo que obliga a utilizar prácticas agrícolas innovadoras (Marini et al., 2020) . Por lo tanto, el cacao ecuatoriano se ubica en una posición competitiv a en el que la adaptación y la sostenibilidad son primordiales. Sin embargo, la germinación y el crecimiento inicial de este cultivo presentan alta sensibilidad ante factores ambientales, como la temperatura y la humedad (Dos Santos et al., 2023) . Estas etapas tempranas también se ven influenciadas por la correcta selección de sustratos, que facilitan la nutrición y el desarrollo radicular. De manera simultánea, el uso de bioestimulantes, en particular Trichoderma spp., promueve un crecimiento más robusto y una mayor eficiencia en la producción (Morillo et al., 2023) . En consecuencia, la adopción de estrategias basadas en microorganismos benéficos cobra relevancia en la agricultura modern a. Aun así, se requiere mayor investigación que evalúe la efectividad conjunta de estos hongos y sustratos en el contexto específico del cacao Nacional Fino de Aroma. En países como Perú, el empleo de cepas nativas de Trichoderma spp. ha demostrado resultados exitosos en la producción de cacao. Por ejemplo, Chavez - Jalk et al. (2022). evidenciaron que cepas endófitas de Trichoderma incrementaron significativamente el crecimiento radicular y la altura de plántulas de Theobroma cacao en c ondiciones de vivero, lo que destaca su potencial en sistemas de propagación temprana. Asimismo, (Leiva et al., 2020) identificaron cepas nativas con alta capacidad de micoparasitismo contra Moniliophthora roreri , agente causal de la pudrición escarchosa de la mazorca, lo que refu erza su rol como agentes de biocontrol. Estos antecedentes regionales validan la pertinencia de evaluar combinaciones cepa - sustrato adaptadas a las condiciones agroecológicas del Ecuador.
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 94 Por otro lado, persiste una brecha de conocimiento sobre la interacc ión detallada entre cepas de Trichoderma spp. y distintos sustratos (Avadí, 2023) . Esta carencia informativa limita la optimización de los rendimientos y la sostenibilidad del cultivo de cacao. Aunque varias investigaciones han estudiado el potencial de Trichoderma spp. como bioe stimulante y agente de control biológico, su impacto directo en la germinación y el crecimiento inicial del cacao Nacional sigue siendo ambiguo. Asimismo, la importancia de examinar las condiciones agroecológicas de Ecuador resulta ineludible, dado que inf luyen en la efectividad de estos microorganismos. Por consiguiente, la exploración de dichas interacciones se vuelve imprescindible para afrontar los retos de la agricultura sostenible. En este contexto, el cacao no solo posee relevancia económica para num erosas regiones tropicales, sino que también representa un cultivo con alto valor sociocultural y potencial para el desarrollo de sistemas productivos sostenibles (Quiroz - Vera et al., 2023) . De igual forma, el empleo de microorganismos benéficos, específicamente cepas de Trichoderma spp., podría constituir un enfoque estratégico en la fase de vivero, facilitando la optimización del crecimiento, la reducción de enfermedades y la adaptación de las plantas a condiciones de estrés abiótico (Morillo et al., 2023) . Aun así, subsisten vacíos en la literat ura sobre la interacción precisa entre estos hongos y distintos sustratos, así como sobre la persistencia a largo plazo de estas cepas en ambientes con características edafoclimáticas variables. Las fases iniciales del establecimiento del cacao en vivero s on altamente sensibles a factores como el tipo de sustrato, la disponibilidad de nutrientes, la incidencia de patógenos y el manejo ambiental, elementos que condicionan directamente la calidad y supervivencia de las plántulas (Pérez - Martínez et al., 2017) . A nivel regional, ensayos controlados han demostrado que la fertilización racional y el uso de sustratos enriquecidos pueden mejorar el desarrollo morfo lógico y fisiológico de plántulas, optimizando su preparación para el trasplante (Quiñones - Cabezas et al., 2024) . En este contexto, el uso de cepas benéficas como Trichoderma spp. surge como una estrategia agroecológica con potencial para reforzar la sanidad, el crecimient o radicular y la resistencia a estreses, sin recurrir a insumos sintéticos, alineándose con los principios de sostenibilidad y bioeconomía circular. Estos indicadores reflejan la necesidad urgente de innovar en las fases tempranas del manejo de cacao, espe cialmente en lo referente a la formulación de sustratos adecuados y al uso de agentes biológicos que favorezcan la sanidad y el desarrollo inicial de las plántulas. Si bien estudios recientes han documentado el efecto positivo de Trichoderma spp. sobre cultivos perennes, incluyendo cacao, en términos de promoción del crecimiento y control de patógenos (Chavez - Jalk et al., 2022; de Sousa et al., 2021a) , persisten vacíos significativos respecto a su interacción con distintos tipos de sustratos bajo condiciones controladas de vivero, par ticularmente en sistemas que emplean cacao Nacional Fino de Aroma. Asimismo, esta investigación se inscribe en el paradigma agroecológico, al fomentar el uso de bioinsumos que reducen la dependencia de productos sintéticos, alineándose con los principios d e bioeconomía circular y agricultura regenerativa (Altieri & Nicholls, 2017) . Por tanto, esta investigación se fundamenta en la hipótesis de que la aplicación de cepas de Trichoderma spp. en sustratos formulados (por ejemplo, turba mezclada con tierra de monte) incrementa
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 95 significativame nte la germinación y el crecimiento inicial de plántulas de cacao Nacional, en comparación con tratamientos sin inoculación. 2. Materiales y Métodos 2.1. Ubicación y condiciones experimentales La investigación se efectuó en los predios del Campus Experimen tal La María de la Universidad Técnica Estatal de Quevedo (UTEQ), provincia de Los Ríos, Ecuador. Según INIAP (2018) , la zona presenta una temperatura promedio anual de 24 °C, preci pitaciones de alrededor de 2000 mm/año y humedad relativa superior al 80 %. Para controlar el clima y la humedad de manera más estable, se empleó un invernadero con cubierta plástica, donde la temperatura osciló entre 24 y 27 °C. El riego se realizó de for ma manual cada tres días, siguiendo lineamientos similares a los descritos por (Hoover, 2018) . La semilla utilizada fue de cacao Nacional, recolectada de mazorcas procedentes del banco de germoplasma de la Finca La Represa de la UTEQ, las cuales mostraban germinabilidad estable en estudios previos (Carranza et al., 2022) . Asimismo, las cepas de Trichoderma spp. (T. harzianum , T. reesei y T. viride ) se obtuvieron del banco de germoplasma de la UTEQ, confirmando s u identidad y viabilidad antes del uso experimental. 2.2. Experimento 1: Germinación de semillas en presencia de Trichoderma spp. 1. Material biológico y pregerminación Se emplearon 240 semillas de T. cacao L. (var. Nacional) seleccionadas por sus características de productividad y resistencia a enfermedades (Carranza et al., 2022) , sometidas a un método pregerminativo consistente en escarificación manual 48 horas previas al establecimiento, seguido de desinfección con hipoclorito de sodio al 1% durante 3 minutos (Kaba et al., 2022) . Las semillas se colocaron en bandejas germinadoras por 8 días. Una vez confi rmada la germinación, se trasladaron a fundas rellenas con el sustrato correspondiente, según el diseño descrito más adelante. 2. Preparación de sustratos y siembra Se esterilizó cada combinación de sustrato (tierra de monte + abono orgánico, tierra de monte + perlita, tierra de monte + turba) en autoclave a 121 °C durante 25 minutos. Una vez enfriados, se dispusieron en fundas de vivero y se sembraron las plántulas de cacao. 3. Diseño experimental Se aplicó un Diseño Completamente al Azar (DCA) con tres tratamientos de sustrato, considerando la adición o presencia de Trichoderma spp. en su etapa inicial (en semilla o en la bandeja germinadora). Cada tratamiento incluyó 80 semillas (repetido en 10 unidades experimentales), totalizando 30 unidades y 240 semillas.
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 96 4. Tratamientos de sustrato T1: Tierra de monte + Abono (proporción 2:1) T2: Tierra de monte + Perlita (2:1) T3: Tierra de monte + Turba (2:1) 2.3. Experimento 2: Crecimiento en vivero y eva luación de distintos sustratos con aplicación de Trichoderma spp. 1. Manejo de cepas de Trichoderma Para facilitar el contacto inicial, se sumergieron las semillas germinadas en una suspensión de esporas (1×10 esporas/mL) antes de su colocación en el sustrat o asignado. El riego se realizó con regadera manual cada tres días, procurando mantener la humedad adecuada para favorecer la germinación y la supervivencia inicial (Hoover , 2018) . 2. Aplicación de cepas de Trichoderma spp. Se reactivaron las cepas en medio Agar Dextrosa de Papa (PDA) a 28 °C por 48 horas (Reyes - Reyes et al., 2022) . Las cepas desarrolladas se inocularon en sustrato de arroz estéril para incrementar la concentración de esporas (aprox. 1×10 esporas/mL). La aplicación se realizó mediante atomizador (2 mL/planta) en dos momentos: a los 15 días de establecidas (experimento 1) y a los 30 días después de la siembra en el vivero. 3. Diseño experimental Se utilizó un Diseño Completamente al Azar con arreglo factorial 5×3 (cinco tra tamientos de Trichoderma cuatro cepas más un control sin Trichoderma y tres sustratos). Cada tratamiento se repitió 5 veces, totalizando 75 unidades experimentales, con 3 observaciones por unidad (225 observaciones totales). 4. Factores considerados Factor A (cepas de Trichoderma ): C1: T. harzianum (1) C2: T. reesei C3: T. harzianum (2) C4: T. viride C5: Control (sin Trichoderma ) Factor B (sustrato): S1: Tierra de monte + Abono orgánico (2:1) S2: Tierra de monte + Perlita (2:1)
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 97 S3: Tierra de monte + Turba (2:1) Se utilizaron cinco repeticiones por tratamiento con diez plántulas cada una, considerando los estándares metodológicos para ensayos en viveros de cacao, que recomiendan entre tres y cinco repeticiones para asegurar precisión estadística y re ducir el error experimental (Pimentel - Gomes & Garcia, 2002) . Esta cantidad permitió aplicar análisis de varianza y pruebas de comparación de medias de forma robusta (Pimentel - Gomes & Garcia, 2002) . 2.4. Variables evaluadas Las siguientes variables se midieron en los momentos oportunos según cada fase (germinación o crecimiento), pero se describen en este apartado de manera unificada para evitar duplicida des 1. Porcentaje de germinación (PG) Para la tasa de germinación, se empleó una fórmula utilizada por Veobides et al. (2018) a los 8 días de la siembra y que consta de los siguientes datos: % 푑푒 푔푒푟푚푖푛푎푐푖 ó = 푆푒푚푖푙푙푎푠 푔푒푟푚푖푛푎푑푎푠 ú 푚푒푟표 푡표푡푎푙 푑푒 푠푒푚푖푙푙푎푠 100 2. Porcentaje de sobrevivencia (PS) Para la tasa de supervivencia fueron registrado a los 15 días de establecido el ensayo, donde se empleó una fórmula utilizada por (Kaba et al., 2022) que consta de los siguientes datos: % 푑푒 푠푢푝푒푟푣푖푣푒푛푐푖푎 = ú 푚푒푟표 푑푒 푝푙푎푛푡푢푙푎푠 푡푓 ú 푚푒푟표 푑푒 푠푒푚푖푙푙푎푠 푔푒푟푚푖푛푎푑푎푠 100 3. Altura de plántula (cm) Medida desde la base hasta el ápice de la parte aérea, con regla graduada (Aguilar Jiménez et al., 2016) . 4. Diámetro de tallo (mm) Se cuantificó con calibrador electrónico, a 2 cm por encima de la raíz (Reyes - Reyes et al., 2022) . 5. Índice de robustez Relación entre la altura y el diámetro del tallo, expresada como una proporción o índice, para evaluar la proporcionalidad y el equilibrio en el crecimiento. Se realizó mediante el empleo de la siguiente fórmula (Sáenz et al. 2018) : í 푛푑푖푐푒 푑푒 푟표푏푢푠푡푒푧 = 퐷푖 á 푚푒푡푟표 푑푒푙 푡푎푙푙표 ( 푐푚 ) 퐴푙푡푢푟푎 푑푒 푝푙푎푛푡푎 ( 푐푚 ) 6. Peso fresco y seco (g) Peso fresco (PF): Se obtuvo inmediatamente tras extraer la plántula del sustrato.
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 98 Peso seco (PS): Luego de la desecación en horno a ~70 °C hasta peso constante, usando balanza de precisión. 7. Longitud radicular (cm) Se midió desde el cuello de la raíz hasta el ápice, con un calibrador de Vernier (Reyes - Reyes et al., 2022) . 8. Volumen radicular (cm³) y área radicular ( cm²) Volumen: Método de desplazamiento de agua en cilindro graduado . Desarrollo basado en ( INIAP, 2018) . Área: Se escanearon las raíces y se analizó la imagen con el software ImageJ (Schneider et al., 2012) . 9. Número de hojas Conteo manual de hojas totalmente expandidas en cada plántula (Reyes - Reyes et al., 2022) . 2.5. Análisis estadístico Para todas las variables cuantitativas, inicialmente se aplicaron las pruebas de normalidad (Shapiro - Wilk) y homogeneidad de varianzas (Levene). Al detectarse que los datos no seguían una distribución normal y presentaban heterogeneidad de varianzas, se optó por la transformación raíz cuadrada (√ x) en todas las mediciones con el fin de estabiliza r la varianza y aproximar la distribución a la normalidad. Esta elección obedeció a que los valores observados eran estrictamente positivos y se adaptaban adecuadamente a dicha transformación (Melo et al., 2020) . Luego de la transformación, se realizó el análisis de varianza (ANOVA) con un nivel de significancia α = 0,05, util izando el software estadístico InfoStat versión 2020 (Infostat, 2020) . Posteriormente, cuando se hallaron diferencias significativas, se empleó la prueba de Tukey para la comparación de medias. 3. Resultados 3.1. Porcentaje de germinación En el análisis del porcentaje de germinación, se observó una consistencia total a través de todos los tratamientos. Cada uno de los tratamientos (T1, T2 y T3) alcanzó un porcentaje de germinación del 100 %. Esta uniformidad indica que, independientemente del sustrato utilizado, la germinación de las semillas de cacao Nacional no se vio afectada. Este resultado es fundamental, ya que sugiere que los factores crít icos que influyen en la sobrevivencia de las semillas se manifiestan en etapas posteriores a la germinación. 3.2 Porcentaje de sobrevivencia (%) Los análisis evidenciaron diferencias notables en la sobrevivencia de las plántulas según el sustrato: T1 alcan zó solo el 52,50 %, mientras que T2 y T3 superaron el 90 %. El análisis de varianza confirmó diferencias estadísticamente significativas entre T1 y los demás tratamientos, sin hallarse discrepancias entre T2 y T3 (p > 0,05). Estas cifras subrayan la influe ncia crítica del sustrato en la viabilidad de las plántulas una vez
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 99 completada la germinación, la cual fue del 100 % en todos los casos. Por consiguiente, se infiere que los factores que influyen en la mortalidad operan mayoritariamente tras el surgimiento de las semillas. 3.3. Índice de robustez, altura y diámetro de las plántulas de cacao Los análisis evidenciaron un comportamiento diferencial para la altura, el diámetro del tallo y el índice de robustez según el sustrato empleado (Figura 1). En primer lu gar, el tratamiento T3 (tierra de monte + turba) alcanzó la mayor altura promedio (16,61 cm), superando a T2 (15,85 cm) y T1 (9,29 cm), con diferencias estadísticamente significativas frente a este último (p < 0,05). De forma similar, el diámetro del tallo fue mayor en T3 y T2 en comparación con T1, aunque las diferencias entre T3 y T2 no resultaron significativas. No obstante, T1 presentó el índice de robustez más elevado, lo que sugiere que, a pesar de un menor crecimiento en altura, la relación entre alt ura y diámetro fue más favorable en este tratamiento que en los demás, como se muestra en la Figura 1. 3.3. Determinación del impacto de cepas seleccionadas de Trichoderma spp . en el crecimiento de plántulas de cacao en distintos sustratos La evaluació n del efecto simple tanto del factor A (cepas de Trichoderma spp . ) como del factor B (sustratos) evidenció diferencias significativas en múltiples parámetros de crecimiento de T. cacao cv. Nacional (Tabla 5). En primer lugar, T. viride alcanzó la mayor alt ura promedio de plántulas (33,65 cm), lo que resalta su potencial para fortalecer el vigor inicial. Por contraste, T. harzianum 1 (25,09 cm) mostró un efecto más moderado, indicando posibles diferencias en adaptabilidad o interacción con las condiciones de l vivero. En lo que respecta al diámetro del tallo, T. reesei se destacó con 6,21 mm, lo que sugiere una predisposición a generar una estructura más robusta. Por el contrario, T. Figura 1 Influencia de diferentes sustratos en el crecimiento inicial de plántulas de cacao Nacional a b b b a a b a a -5,00 0,00 5,00 10,00 15,00 20,00 25,00 ïndice de robustez Altura de plahta Diámetro Altura, diámetro e índice de robustez Tratamientos T1. TIERRA DE MONTE + ABONO ORGÁNICO T2. TIERRA DE MONTE + PERLITA Nota : En la figura 1 se observa los valores medios de las variables diámetro del tallo, altura de planta y el índice de robustez para las plántulas de cacao Nacional creciendo en tres sustratos diferentes (T1, T2, T3), con barras de error que representan la desviación estándar. Las letr as indican diferencias estadísticamente significativas entre tratamientos según la prueba de Tukey (p > 0.05).
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 100 harzianum 2 registró el menor diámetro (5,58 mm) entre las cepas evaluadas. A simismo, el número de hojas no se vio potenciado por la presencia de hongos benéficos, pues el control (14,84 hojas) superó a las plántulas tratadas con Trichoderma . Sin embargo, T. viride lideró en peso fresco aéreo (13,89 g) y peso seco aéreo (7,53 g), i ncluso por encima del control. Este hallazgo pone de manifiesto su eficacia para promover un mayor crecimiento vegetativo global, reflejado en el aumento de la biomasa. Además, el análisis de la composición de los sustratos corroboró que las diferencias ob servadas en el desarrollo aéreo están estrechamente vinculadas con la interacción específica entre cepas de Trichoderma y los materiales empleados, subrayando la importancia de elegir estrategias personalizadas para la propagación sostenible de cacao, en l a Tabla 1 se muestra los valores. Tabla 1 Efecto simple de las variables altura, diámetro número de hojas peso fresco y seco aéreo. FACTOR A AP DT NH PFA PSA T. harzianum 1 25,09 c 5,9 ab 13,73 ab 11,3 ab 6,81 a T. reesei 32,67 ab 6,21 a 13,69 ab 11,2 ab 6,29 a T. harzianum 2 28,68 bc 5,58 b 12,42 b 9,02 b 5,4 a T. viride 33,65 a 6,09 ab 13,6 ab 13,9 a 7,53 a Control 32,91 ab 6,08 ab 14,84 a 12,5 a 7,03 a FACTOR B AP DT NH PFA PSA SP 31,11 ab 6,11 a 13,76 a 11,9 a 5,44 b ST 32,44 a 5,75 a 13,77 a 10,6 a 6,9 ab SAO 28,26 b 6,05 a 13,44 a 12,2 a 7,5 a Nota: AP (Altura Plántulas), DT (Diámetro del tallo), NH (Numero de hojas), PFA (Peso Fresco Aéreo), PSA (Peso Seco Aéreo), SP (Sustrato Perlita), ST (Sustrato Turba), SAO (Sustrato Abono Orgánico). 3.4. Efecto de la interacción en la aplicación de Trichoderma spp en plántulas de cacao Nacional La evaluación conjunta de las cepas de Trichoderma spp . y los sustratos empleados evidenció resultados diferenciados en diversos parámetros de crecimiento y d esarrollo de T. cacao Nacional. A continuación, se describen los hallazgos más relevantes para cada variable evaluada. 3.4.1. Peso fresco aéreo (g) La aplicación de T. viride en turba alcanzó el mayor peso fresco aéreo, con 16,05 g, lo que indica una marca da sinergia entre esta cepa y el sustrato para promover la formación de biomasa. En comparación, los tratamientos control con agua destilada
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 101 mostraron valores inferiores, reafirmando la incidencia positiva de la inoculación con Trichoderma spp . sobre la pr oducción de masa vegetal. 3.4.2. Peso seco aéreo (g) De manera similar, T. viride destacó en peso seco aéreo, con 9,19 g en turba y 9,07 g en perlita. Estos datos subrayan la efectividad de esta cepa para incrementar la biomasa aérea, esencial para la productividad a mediano y largo plazo. El control con agua destilada, aunque tuvo un efecto favorable, no superó los resultados obtenidos con T. viride. 3.4.3. Peso fresco radicular (g) En el sistema radicular, T. viride en perlita obtuvo el valor más elevado de peso fresco (12,18 g), evidenciando la ventaja de la alta porosidad de este su strato combinada con la actividad promotora de la cepa. Por el contrario, T. harzianum 2 en turba presentó el promedio más bajo (4,5 g), lo que indica una respuesta menos favorable en esa combinación específica, como se muestra en la Figura 2. Figura 2 Peso fresco radicular de las plántulas de cacao por aplicación de Trichoderma spp . Nota : En la figura 2, las letras indican grupos estadísticos significativos donde tratamientos que comparten letras no difieren significativamente entre sí según la prueba d e comparación múltiple (p > 0.05). 3.4.3. Peso seco radicular (g) El parámetro de peso seco radicular alcanzó su máximo con T. viride en perlita (6,91 g). Este resultado reafirma la importancia de la interacción hongo - sustrato para un crecimiento robusto de las raíces. Por otro lado, las plantas control regadas con agua mostraron valores menores, evidenciando la contribución positiva de Trichoderma spp . en la acumulación de biomasa radicular, como se muestra en la Figura 3.
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 102 Figura 3 Peso seco radicular de las plántulas de cacao por aplicación de Trichoderma spp. Nota : En la figura 3, las letras indican grupos estadísticos significativos donde tratamientos que comparten letras no difieren significativamente entre sí según la prueba d e comparación múltiple (p > 0.05). 3.4.4. Altura de la plántula (cm) La mayor altura promedio (38,31 cm) se registró con T. viride en perlita, lo que revela una combinación óptima para maximizar el crecimiento vertical de las plántulas. Cabe señalar que el sustrato turba, incluso en ausencia de Trichoderma spp . , también mantuvo un desempeño favorable (36,97 cm), confirmando las propi edades beneficiosas de la turba para el crecimiento de T. cacao , como se muestra en la Figura 4. Figura 4 Altura de plántulas de cacao por aplicación de Trichoderma spp .
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 103 Nota : En la figura 4, las letras indican grupos estadísticos significativos donde tr atamientos que comparten letras no difieren significativamente entre sí según la prueba de comparación múltiple (p > 0.05). 3.4.5. Diámetro del tallo (mm) El diámetro del tallo más elevado (7,02 mm) se obtuvo con T. reesei en turba. Este hallazgo indica q ue ciertas cepas de Trichoderma spp . pueden orientar el crecimiento hacia una mayor robustez estructural. Asimismo, T. harzianum cepa 2 en abono alcanzó 6,76 mm, revelando una respuesta igualmente prometedora en condiciones específicas de fertilidad orgáni ca, como se muestra en la Figura 5. Figura 5 Diámetro del tallo de las plántulas de cacao por aplicación de Trichoderma spp . Nota : En la figura 5, las letras indican grupos estadísticos significativos donde tratamientos que comparten letras no difieren significativamente entre sí según la prueba de comparación múltiple (p > 0.05). 3.4.6. Índice de robustez En cuanto al índice de robustez, calculado como el cociente entre altura y diámetro del tallo, la interacción de T. harzianum 1 con turba se destacó con un valor de 0,47. Este dato sugiere que la cepa y el sustrato favorecen conjuntamente una arquitectura que equilibra altura y grosor del tallo, característica esencial para la resistencia mecánica y la adaptación al entorno, como se muestra en la Figura 6.
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 104 Figura 6 Índice de robustez de las plántulas de cacao por aplicación de Trichoderma spp . Nota : En la figura 6, las letras indican grupos estadísticos significativos donde tratamientos que comparten letras no difieren significativamente entre sí según la prueba de comparación múltiple (p > 0.05). 3.4.7. Número de hojas Finalmente, la mayor cantida d de hojas (15,13) se obtuvo con la combinación de T. viride y perlita, resaltando una vez más el potencial de esta cepa y la aireación aportada por la perlita. Asimismo, T. reesei en abono (15,00) y el control regado con agua en abono (14,93) también exhi bieron resultados destacados, evidenciando que el aporte nutritivo del sustrato orgánico puede ser determinante para la proliferación foliar. En síntesis, las variaciones registradas confirman que la respuesta de T. cacao a la inoculación con Trichoderma s pp . depende tanto de la cepa seleccionada como del sustrato disponible, lo que ofrece oportunidades de optimizar prácticas de propagación y manejo agronómico para mejorar la productividad y resiliencia del cultivo. 3.5. Evaluación de la influencia de difer entes cepas de Trichoderma spp. y sustratos en el volumen y longitud radicular de las plántulas de cacao Nacional En esta fase del estudio, se analizó la influencia de diversas cepas de Trichoderma spp . (Factor A) y de distintos sustratos (Factor B) sobre el volumen y la longitud radicular de las plántulas de cacao Nacional. El objetivo fue determinar qué combinaciones optimizan el desarrollo subterráneo de la planta, reflejado en una mayor exploración d el perfil del suelo y, por consiguiente, en el fortalecimiento de la adquisición de nutrientes y agua. Tal como se ilustra en la Tabla 2 , la cepa T. harzianum 1 alcanzó el volumen radicular más elevado (8,58 mL), mostrando diferencias estadísticas respect o a T. harzianum 2 (6,64 mL) y tendiendo a superar los valores de las demás cepas y del control. No obstante, para la longitud radicular, los resultados no evidenciaron diferencias marcadamente significativas entre las cepas evaluadas, lo que sugiere que, aunque T. harzianum 1 promueve una mayor masa radicular, la extensión de las raíces no parece variar de forma notable al comparar todas las cepas con el control.
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 105 Por otro lado, al considerar los sustratos (tierra de monte + perlita, tierra de monte + turb a y tierra de monte + abono orgánico), se aprecia que las medias no difieren estadísticamente ni en volumen ni en longitud. Este hallazgo podría indicar que, bajo las condiciones del ensayo, la composición del sustrato ejerce un efecto menos determinante q ue el tipo de cepa de Trichoderma en cuanto a la capacidad de las raíces para expandirse y acumular biomasa. En conjunto, los resultados señalan que la elección de la cepa de Trichoderma resulta crítica para fortalecer el sistema radicular, mientras que lo s tres sustratos considerados ofrecen un desempeño similar, al menos en relación con el volumen y la longitud de las raíces. T abla 2 Efecto simple de las variables volumen y longitud radicular FACTOR A Volumen radicular Longitud radicular T. harzianum 1 8,58 a 24,84 a T. reesei 8,07 ab 23,38 a T. harzianum 2 6,64 b 21,26 a T. viride 6,96 ab 24,72 a Control 8,31 ab 24,01 a FACTOR B Volumen radicular Longitud radicular T M + perlita 7,87 a 7,87 a TM + turba 7,99 a 7,99 a T M + abono orgánico 7,28 a 7,28 a 3.5.1. Volumen radicular (cm 3 ) Las cepas Trichoderma harzianum 1 y Trichoderma resei , cultivadas en abono, presentaron los mayores volúmenes radiculares, con 9,33 cm³ y 9,27 cm³ respectivamente. Además, Trichoderma harzianum cultivado en turba mostró un buen desempeño, alcanzando un volumen radicular de 9,13 cm³. En lo que respecta a la perlita como sustrato, tanto Trichoderma viride como Trichoderma harzianum cepa 2 alcanzaron volúmenes radiculares significativos, con 8,53 cm³ y 8,13 cm³ respectivamente. En contraste el control en perlita obtuvo un volumen radicular de 8,00 cm³, respaldando la idea de que la perlita facilita el crecimiento radicular independientemente de la presencia de Trichoderma . Sin embargo, Trichoderma harzianum cepa 2 y Trichoderma viride experimentaron los menores volúmenes radiculares en turba, con solo 4,80 cm³, mientras que, control con agua destilada en abono también destacó con un volumen radicular de 8,94 cm³, lo que indica que el abono por sí so lo contribuye al crecimiento de las raíces, como se muestra en la Figura 7.
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 106 Figura 1 Volumen radicular de las plántulas de cacao por aplicación de Trichoderma spp . Nota: En la figura 7, Las letras indican grupos estadísticos significativos donde tratamientos que comparten letras no difieren significativamente entre sí según la prueba de comparación múltiple (p > 0.05). 3.5.2. Longitud radicular En relación con la longitud radicular, Trichoderma harzianum 1 en perlita obtuvo un a longitud promedio de 28,17 cm, seguido de Trichoderma viride en el mismo sustrato con 26,80 cm. En contraste, Trichoderma resei en perlita también mostró una longitud radicular considerable de 26,03 cm lo que indica una eficiencia comparable con las otra s cepas en este sustrato. Mientras que, el control con agua destilada reflejó longitudes radiculares de 24,88 cm en turba y 24,43 cm en perlita, lo que demuestra que los sustratos, en ausencia de Trichoderma , desempeñan un papel sustancial en el crecimient o radicular. No obstante, Trichoderma harzianum cepa 2 obtuvo la menor longitud radicular en turba, con 17,25 cm, señalando una interacción potencialmente desfavorable entre esta cepa y el sustrato de turba, como se muestra en la Figura 8 .
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 107 Figura 8 Longitud radicular de las plántulas de cacao por aplicación de Trichoderma spp . Nota : En la figura 8, l as letras indican grupos estadísticos significativos donde tratamientos que comparten letras no difieren significativamente entre sí según la prueba de comparación múltiple (p > 0.05). 4. Discusión 4.1. Germinación y supervivencia de plántulas La germinación de las semillas de Theobroma cacao fue alta en todos los tratamientos (>95 %), lo que sugiere que la inoculación con Trichoderma spp. no afectó negativamente este proceso, en coincidencia con lo reportado por de Sousa et al. (2021) , quienes documentaron una germinación normal tras la aplicación de cepas del hongo. Sin embar go, la supervivencia de las plántulas sí se vio influida por el tipo de sustrato. Las mezclas con turba promovieron tasas superiores al 90 %, atribuibles a su elevada retención de humedad y buena aireación (de Oliveira et al., 2024) . Estas condiciones físicas crean un microambiente favor able para la colonización radicular por Trichoderma y reducen el estrés hídrico postgerminativo (Harni et al., 2019) . Además, la interacción simbiótica de Trichoderma spp. con las raíces podría haber indu cido mecanismos de defensa sistémica, favoreciendo la sanidad de las plántulas (Avilés et al., 2023; Puspita et al., 2020) . Este efecto protector ha sido señalado como clave para reducir la incidencia de enfermedades causadas por patógenos como Phytophtho ra palmivora y Moniliophthora roreri , que afectan la etapa de vivero y el establecimiento en campo (Chavez - Jalk et al., 2022; Morillo et al., 2023) . 4.2. Crecimiento aéreo: altura, biomasa y hojas Las plántulas tratadas con T. viride alcanzaron mayores alturas, número de hojas y biomasa aérea en comparación con el control, confirmando su capacidad bioestimulante. Estos resultados pueden explicarse por la producción de fitohormonas como el ácido indo lacético (AIA), giberelinas y citocininas por parte de Trichoderma spp. , que estimulan el crecimiento vegetativo a través de la elongación celular y la división de tejidos meristemáticos (Tyśkiewicz et al., 2022) ; Además, la mejora en la disponibilidad de nutrientes prom ovida por la actividad microbiana incrementa la eficiencia fotosintética, favoreciendo el desarrollo foliar (Morillo et al., 2023) .
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 108 Desde una perspectiva agroecológica, este tipo de respuesta promueve un inicio de ciclo vigoroso y homogéneo, lo que contribuye a una mayor probabilidad de éxito tras el trasplante en campo ( (Cahyaningrum et al., 2024) . 4.3. Desarrollo radicular: volumen, longitud y biomasa El efecto de las cepas de Trichoderma spp. fue especialmente notable en el sistema radicular. T. harzianum presentó mayor vo lumen radicular en sustratos con abono orgánico, mientras que T. viride sobresalió en perlita, lo que confirma la interacción específica entre cepa y medio de cultivo. Estos resultados están en línea con (Cedeño Andrade & Sánchez Vásquez, 2022) y con (Erf andari et al., 2024) , quienes señalan que la eficacia de Trichoderma está influida por las características físicas y químicas del sustrato. Fisiológicamente, esta estimulación puede atribuirse a la producción de AIA, la solubilización de fosfatos, la li beración de sideróforos y la secreción de enzimas como celulasas y quitinasas que mineralizan la materia orgánica (Tandon et al., 2022) . Estos procesos incrementan la superficie de absorción de las raíces y la captación de nutrientes esenciales, impactando directamente en la biomasa y el vigor de las plántulas. 4.4. Influencia del tipo de sustrato El tipo de sustrato jugó un rol determinante en la expresión de los efectos del hongo. La turba favoreció la supervivencia y el crecimiento aéreo; la perlita promovió el desarrollo radicular más vigoroso, probablemente por su elevada aireación; y el abono orgánico incrementó el volumen radicular, al aportar nutrientes y mejorar la actividad microbiana (de Oliveira et al., 2024; Hoover, 2018; Trujillo - Elisea et al., 2022) . Esta variabilidad sugiere que el éxito de la inoculación depende tanto de la cepa fúngica como del medio en que se establece, lo que concuerda con hallazgos recientes sobre la necesidad de pers onalizar las combinaciones cepa - sustrato según los objetivos de producción (Cahyaningrum et al., 2024; Erfandari et al., 2024) . 4.5. Limitaciones del estudio Entre las principales limitaciones se encuentra la restricción del ensayo a condiciones de vivero controladas, lo que impide extrapolar los resultados directamente a campo. Además, no se evaluaron parámetros fisiológicos como el contenido de clorofila ni se realizaron análisis moleculares para confirmar la colonización radicular o la expresión de genes de defensa. Est as limitaciones deben abordarse en estudios futuros que consideren la persistencia de los efectos bajo estrés abiótico o biótico real. 4.6. Implicaciones en sostenibilidad y agroecología El uso de Trichoderma spp. se alinea con los principios de agricultur a regenerativa y bioeconomía circular, al reducir la dependencia de insumos sintéticos sin comprometer la productividad (Altieri & Nicholls, 2017; Kusnezowa & Vang, 2021) . Además, su inclusión en protocolos de vivero permite cumplir con los requisitos de sostenibilidad de certificaciones internacionales como Comercio Justo o Rainforest Alliance ( (Osinowo & Oseni, 2024) . En el contexto del cacao Nacional Fino de Aroma, esta estrategia contribuye a consolidar un sistema productivo diferenciado por su calidad, trazabilidad y bajo impacto amb iental (Guevara - viej et al., 2024; Morillo et al., 2023) .
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 109 4.7. Proyecciones y futuras líneas de investigación Futuras investigaciones deberían enfocarse en ensayos de campo para validar la efectividad de Trichoderma en condiciones edafoclimáticas variables y evaluar su impacto en el rendimiento a largo plazo. Además, sería valioso realizar análisis de costo - benefi cio para determinar la viabilidad económica de su implementación a escala comercial. Estudios moleculares que investiguen las interacciones planta - hongo a nivel génico y proteico también aportarían información valiosa sobre los mecanismos de acción de Tric hoderma y su potencial para mejorar la tolerancia de las plantas a estreses bióticos y abióticos . 5. Conclusiones Los hallazgos de la presente investigación demuestran que la germinación de las semillas de cacao Nacional no varía significativamente entre l os sustratos evaluados. Sin embargo, la supervivencia se incrementa de forma notable en la mezcla de tierra de monte con turba, lo que sugiere que los factores que influyen en la viabilidad de las plántulas se manifiestan en etapas posteriores a la germina ción. Asimismo, la combinación de Trichoderma viride con perlita promovió un desarrollo radicular destacado, evidenciado en un peso fresco y seco radicular superior, así como en un área radicular más extensa. Por otra parte, el mayor volumen radicular se alcanzó con T. harzianum cepa 1 en la mezcla de tierra de monte y abono, lo que pone de manifiesto la importancia del contenido orgánico para estimular la actividad de ciertas cepas. En esencia, la elección tan to del sustrato como de la cepa de Trichoderma spp . depende de las variables que se pretenda optimizar (por ejemplo, sobrevivencia, biomasa radicular o área foliar). Por consiguiente, su uso integrado constituye una estrategia prometedora para incrementar la eficiencia y sostenibilidad en la producción de Theobroma cacao . Contribución de los autores: Conceptualización, MSC - P y VCRC; metodología, AVCM; software, JATR; validación, MSC - P; análisis formal, CVMC; investigación, MSC - P y VCRC; recursos, MSC - P y VC RC; conservación de datos, JATR; redacción del borrador original, MSC - P y VCRC; redacción, revisión y edición, MSC - P y VCRC; visualización, AVCM; supervisión, CVMC; administración del proyecto, MSC - P; obtención de financiación, MSC - P. Todos los autores han leído y aceptado la versión publicada del manuscrito. Financiamiento: Esta investigación no ha recibido financiación externa. Agradecimientos: A la Universidad Técnica Estatal de Quevedo (UTEQ), Facultad de Posgrados y a la Secretaría de Educación Superio r, Ciencia, Tecnología e Innovación (SENESCYT), programa de becas. Declaración de disponibilidad de datos: Los datos están disponibles previa solicitud a los autores de correspondencia: mcarranza @uteq.edu.ec Co nflicto de interés: Los autores declaran no tener ningún conflicto de intereses
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 110 Referencias bibliográficas Aguilar Jiménez, C. E., Alvarado Cruz, I., Martínez Aguilar, F. B., Galdámez Galdámez, J., Gutiérrez Martínez, A., & Morales Cabrera, J. A. (2016). Evaluación de tres abonos orgánicos en el cultivo de café (Coffea arabica L.) en etapa de vivero. Siembra , 3 , 11 20. Altieri, M. A., & Nicholls, C. I. (2017). The adaptation and mitigation potential of traditional agriculture in a changing climate. Climatic Change , 140 , 33 45. Avadí, A. (2023). Environmental assessment of the Ecuadorian cocoa value chain with statistics - based LCA. International Journal of Life Cycle Assessment , 28 (11), 1495 1515. https://doi.org/10.1007/S11367 - 023 - 02142 - 4/FIGURES/11 Avilés, D., Espinoza, F., Vil lao, L., Alvarez, J., Sosa, D., Santos - Ordóñez, E., & Galarza, L. (2023). Application of microencapsulated Trichoderma spp. against Moniliophthora roreri during the vegetative development of cocoa. Scientia Agropecuaria , 14 (4), 539 547. Cahyaningrum, D. G., Siwi, K. H. M., Sugiyarto, S., Harlianingtyas, I., & Dinata, G. F. (2024). Growth response of cocoa seedlings (Theobroma cacao L.) ICCRI 06 clone with application of manure and Trichoderma sp. Agrovigor: Jurnal Agroekoteknologi , 17 (2), 55 63. https://doi.org/10.21107/AGROVIGOR.V17I2.26989 Carranza, M., Carriel, J. M., Rosero, N. J. C., Jiménez - Romero, E., & Flórez, J. E. M. (2022). RESCUE OF COCOA NATIONAL VARIETY: GENETIC POTENTIAL OF SELECTION. Journal of Pharmaceutical Negative Resul ts , 13 (3), 615 622. Cedeño Andrade, D. L., & Sánchez Vásquez, K. D. (2022). Efecto de Trichoderma spp y biochar en plántulas de cacao (Theobroma cacao) . Calceta: ESPAM MFL. Chavez - Jalk, A., Leiva, S., Bobadilla, L. G., Vigo, C. N., Arce, M., & Oliva - Cruz, M. (2022). Effect of Endophytic Trichoderma sp. Strains on the Agronomic Characteristics of Ecotypes of Theobroma cacao L. under Nursery Conditions in Peru. International Journal of Agronomy , 2022 . https://doi.org/10.1155/2022/5297706 de Oliveira, F. de A. , Dos Santos, S. T., Melo, M. R. d. S., de Oliveira, M. K. T., Travassos, K. D., de Sousa, L. V., & Pinto, F. F. B. (2024). Gas exchange and growth of bell pepper grown in different substrates under salinity stress. Horticultura Brasileira , 42 , 1 8. https: / / doi.org/ 10.1590 / s 0102 - 0536 - 2024 - e 288866 de Sousa, W. N., Brito, N. F., Felsemburgh, C. A., Vieira, T. A., & Lustosa, D. C. (2021a). Evaluation of Trichoderma spp. Isolates in Cocoa Seed Treatment and Seedling Production. Plants , 10 (9). https://doi.org/10 .3390/PLANTS10091964 de Sousa, W. N., Brito, N. F., Felsemburgh, C. A., Vieira, T. A., & Lustosa, D. C. (2021b). Evaluation of Trichoderma spp. Isolates in Cocoa Seed Treatment and Seedling Production. Plants , 10 (9), 1964. https://doi.org/10.3390/PLANTS100 91964 Dos Santos, A. S., Braz, M. I. G., Dos Santos de Barros, C., de Cássia Quitete Portela, R., & de Mattos, E. A. (2023). Sensitivity of seed germination to water stress in high altitude populations of a threatened palm species. Plant Biology , 25 (4), 593 602. Erfandari, O., Azis, A., Nurmayanti, S., Sudirman, A., & Sahara, E. (2024). Growth
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 111 Response of Cocoa Seedlings (Theobroma cacao L.) in several Combinations of Planting Media and Trichoderma sp. as Biological Fertilizer. Jurnal Biologi Tropis , 24 (3 ), 515 519. https://doi.org/10.29303/JBT.V24I3.7254 Gómez, M. C., & Rocha, M. I. M. (2018). Turismo gastronómico del cacao y el chocolate, tendencias latinoamericanas. Gran Tour , 18 , 58 76. Guevara - viej, F., Valenzuela - cobos, J. D., Noriega - verdugo, D., & Quilligana, R. B. (2024). Applied sciences Application of Biplot Techniques to Evaluate the Potential of Trichoderma spp . as a Biological Control of Moniliasis in Ecuadorian Cacao. Aplied Science , 14 , 5481. https://doi.org/https://doi.org/10.3390/app14135 481 Harni, R., Amaria, W., Mahsunah, A. H., & Lakani, I. (2019). Effect of Trichoderma spp. Secondary Metabolites and Botanical Fungicide to Control VSD Disease in Cacao. Jurnal Tanaman Industri Dan Penyegar , 6 (3), 109 118. https://doi.org/10.21082/JTIDP.V 6N3.2019.P109 - 118 Hoover, B. K. (2018). Herbaceous perennial seed germination and seedling growth in biochar - amended propagation substrates. HortScience , 53 (2), 236 241. https://doi.org/10.21273/HORTSCI12624 - 17 Infostat. (2020). Infostat - Software estadís tico . Grupo InfoStat, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Universidad Nacional de Córdoba, Argentina. https://www.infostat.com.ar/ INIAP. (2018). La cadena de valor del cacao en America Latina y El Caribe . Kaba, J. S., Asare, A. Y., Andoh, H., Kwashie, G. K. S., & Abunyewa, A. A. (2022). Toward Sustainable Cocoa (Theobroma Cacao L) Production: The role of potassium fertilizer in cocoa seedlings drought recovery and survival. International Journal of Fruit Science , 22 (1), 618 627. Kusnezowa, D., & Vang, J. ( 2021). Creating legitimacy in the ISO/CEN standard for sustainable and traceable cocoa: an exploratory case study integrating normative and empirical legitimacy. Sustainability , 13 (22), 12907. Leiva, S., Oliva, M., Hernández, E., Chuquibala, B., Rubio, K., García, F., & de la Cruz, M. T. (2020). Assessment of the potential of trichoderma spp. strains native to bagua (Amazonas, Peru) in the biocontrol of frosty pod rot (Moniliophthora roreri). Agronomy , 10 (9). https://doi.org/10.3390/agronomy10091376 Marini, M., Caro, D., & Thomsen, M. (2020). The new fertilizer regulation: a starting point for cadmium control in European arable soils? Science of the Total Environment , 745 , 140876. Melo, R. C. de, Trevisani, N., Santos, M. dos, Guidolin, A. F., & Coimb ra, J. L. M. (2020). Statistical model assumptions achieved by linear models: classics and generalized mixed. Revista Ciência Agronômica , 51 , e20196716. Morillo, E., Buitron, J., & Quiroz - Vera, J. (2023). Genetic expression of Linalool in highly homozygoti c national cocoa genotypes from the leading traditional cocoa - growing areas in Ecuador. Bionatura , 8 (2). https://doi.org/10.21931/RB/2023.08.02.20 Osinowo, O. H., & Oseni, I. O. (2024). The impact of agricultural value chains on sustainable industrial deve lopment in Sub - Saharan Africa. Journal of Agribusiness and Rural Development , 2 [72] . Pérez - Martínez, S., Noceda, C., Zambrano, O., Parra, D., Cordova, L., & Sosa, D.
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 112 (2017). Descripción de plagas en viveros de cacao en el cantón Milagro a partir de difere ntes fuentes de información.// Description of pests in cacao vivarium in Milagro canton from different sources of information. Ciencia Unemi , 10 (24), 19 38. https://doi.org/10.29076/issn.2528 - 7737vol10iss24.2017pp19 - 38p Pimentel - Gomes, F., & Garcia, C. H. (2002). Estatística aplicada a experimentos agronômicos e florestais: exposição com exemplos e orientações para uso de aplicativos . Puspita, F., Ali, M., Supriyadi Fakultas Pertanian, dan, Riau Jalan Soebrantas Km, U. H., & Baru, S. (2020). Kompatibilitas dan Daya Hambat Konsorsium Trichoderma spp. Endofit terhadap Penyakit Busuk Buah Kakao Phytophthora palmivora. Agrikultura , 31 (2), 126. https://doi.org/10.24198/AGRIKULTURA.V31I2.26063 Quiñones - Cabezas, J. A., Quiñones - Quiñones, J. L., & Ballesteros - Possú, W. (2024). Effect of fertilization on cocoa plants, Theobroma cacao L., in the southern Colombian region. Revista de Ciencias Agrícolas , 41 (2), e2231. https://doi.org/10.22267/rcia.202 44102.231 Quiroz - Vera, J., Morillo, E., Cordoba, C., & Buitron, J. (2023). Molecular characterization of national cocoa collection from the leading traditional growing areas in Ecuador. Bionatura , 8 (1). https://doi.org/10.21931/RB/2023.08.01.31 Reyes - Reyes, J., Rodríguez - Morales, A., Pimienta de la Torre, D. de J., Fuentes Pérez, M. A., Aguirre Medina, J. F., & Merino García, A. (2022). Diagnóstico de la calidad de planta en el vivero forestal El Campanario, Tuxtla Chico, Chiapas. Ecucba , 9 (17), 29 37. Sáenz, T., Muñoz, J., Pérez, C., Rueda, A., & Hernández, J. (2018). Calidad de planta de tres especies de pino en el vivero Morelia ”, estado de Michoacán. Revista Mexicana de Ciencias Forestales , 5 (26), 98 111. https://doi.org/10.29298/rmcf.v5i26.2 93 Schneider, C. A., Rasband, W. S., & Eliceiri, K. W. (2012). NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nature Methods 2012 9:7 , 9 (7), 671 675. https://doi.org/10.1038/nmeth.2089 Tandon, A., Anshu, A., Kumar, S., Yadav, U., Mishra, S. K., Srivastav a, S., Chauhan, P. S., Srivastava, P. K., Bahadur, L., & Shirke, P. A. (2022). Trichoderma primed rice straw alters structural and functional properties of sodic soil. Land Degradation & Development , 33 (5), 698 709. Thomas, E., Loor, R., Argout, X., Fouet, O., & Zambrano, F. (2024). Diversidad genética de cacao en el Ecuador (R. L. Evert Thomas, Fanny Zambrano Flores (ed.); Bioversity, Issue July). Trujillo - Elisea, F. I., Labrín - Sotomayor, N. Y., Becerra - Lucio, P. A., Becerra - Lucio, A. A., Martínez - Heredia, J. E., Chávez - Bárcenas, A. T., & Peña - Ramírez, Y. J. (2022). Plant growth and microbiota structural effects of Rhizobacteria inoculation on mahogany (Swietenia macrophylla King [Meliaceae]) under nursery conditions. Forests , 13 (10), 1742. Tyśkiewicz, R., Nowak, A., Ozimek, E., & Jaroszuk - ściseł, J. (2022). Trichoderma : estado actual de su aplicación en la agricultura para el biocontrol de hongos fitopatógenos y la estimulación del crecimiento vegetal. Revista Internacional de Ciencias Moleculares , 23 (4), 2329. https://www.mdpi.com/1422 - 0067/23/4/2329/htm%0Ahttps://www.mdpi.com/1422 - 0067/23/4/2329 Valdez, F. (2021). El cacao fino de aroma, el cacao ancestral emblemático del
Multdisciplinary Collaboratve Journal Multidisciplinary Collaborative Journal | Vol.0 3 | Núm.0 2 | Abr Jun | 202 5 | https://mcjournal.editorialdoso.com 113 Ecuador. Patrimonios Alimentarios En América Latina: Recursos Locales, Actores y Glo balización , 48 , 135 159.